中文摘要：

经皮冠脉介入术后再狭窄（RS）的防治是心血管研究领域的重要课题。组织蛋白酶（Cathepsin）作用下的细胞外基质降解和血管平滑肌细胞 (SMCs)迁移是导致RS发生的重要环节。我室前期研究证实E1A激活基因阻遏子（CREG）对RS的发生具有保护作用；在CREG过表达和基因沉默的SMCs中Cathepsin K与CREG的表达状态具有明显的相关性，但其具体机制尚不清楚。本研究拟采用药理学与基因干预相结合、在体现象观察与离体机制研究相结合的研究模式，在整体动物、细胞和分子水平上综合验证CREG对Cathepsin K蛋白含量的调节作用，探讨CREG调控Cathepsin K的内吞与再循环机制，确定CREG对Cathepsin K的调节作用对细胞外基质降解、SMCs迁移及RS发生的影响。课题的实施有助于进一步理解SMC迁移和RS发生的分子机制，并有望为RS的防治提供新的策略和干预靶点。

结论摘要：

在本项目中，课题组在整体和细胞两个水平复制心肌成纤维细胞表型转化模型，运用形态学、细胞生物学、分子生物学等技术，就血管损伤后CREG基因表达对血管外膜增生、肌成纤维细胞及内皮细胞表型转化，以及MAPK信号转导通路在其中发挥的调控作用等方面的问题进行了研究，阐明了CREG基因对损伤血管细胞表型转化的调控作用及其机制。主要研究内容和结果如下（1）CREG基因表达与AFs表型转化具有负相关关系。发现α-SMA仅在正常血管中膜表达，外膜没有表达，损伤1 d后血管外膜开始增生，并有少量α-SMA表达，提示开始有AFs转化为MFs，损伤3 d后血管外膜增生最明显，α-SMA在外膜中大量表达，而在损伤7 d和14 d后，外膜增生程度有所缓解，α-SMA的表达也逐渐减少；正常血管外膜大量表达CREG蛋白，损伤1 d后CREG在外膜中的表达开始减少，损伤3 d后外膜中几乎没有CREG表达，而在损伤7 d和14 d后CREG在血管外膜中的表达逐渐恢复。（2）AFs表型转化过程中CREG表达下调，提示CREG基因表达变化可能与AFs表型转化相关。（3）CREG基因过表达抑制Ang II诱导的AFs表型转化。CREG基因过表达可抑制Ang II诱导的AFs增殖。在Ang II的趋化作用下，AFs迁移活性明显增强，表现为划痕区域的细胞覆盖数目增加，迁移至Transwell下室的细胞数目增多，而CREG基因过表达明显减少划痕区域的细胞覆盖数目。（4）CREG可通过抑制和延迟NF-κB的表达活化，对抗TNF-α刺激引起的VECs炎症反应和细胞通透性增加，对抗内皮细胞病理性损伤发生。