本研究分离纯化得到了对虾精氨酸激酶,研究了化学性质和催化反应动力学性质,同时,克隆得到了其全长cDNA序列,并且对其体外表达,得到其抗体,采用westernblot技术和realtime-PCR技术研究了精氨酸激酶在蛋白质和mRNA水平对虾不同组织的表达;阐明了其组织表达谱。采用不同类型免疫刺激剂对对虾进行免疫刺激,研究了对虾凝集素、酚氧化酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、溶菌酶等重要免疫指标的表达变化,同时结合血细胞的数量及稳定性的变化,在分子生物学、生物化学和细胞学水平上研究了对虾在免疫反应中的作用。阐释了对虾在受到病原感染和病原模式分子刺激后的反应机理,分析了对虾精氨酸激酶与它们之间的关系;对于免疫反应中重要变化的样品采用蛋白质组学进行了分析,发现了一批与精氨酸激酶催化的代谢反应和免疫相关的重要的蛋白质,采用GST-PULLDOWN技术和酵母双杂交技术发现并验证了与精氨酸激酶相互作用的蛋白质。对与发现的与精氨酸激酶密切相关的免疫因子一氧化氮合酶,CaM等进行了深入研究,初步得到了对虾免疫反应和代谢反应相关关系的网路结构。
英文主题词Arginine kinase; shrimp; immune response; protein interaction; function mechanism