中文摘要：

自噬在细胞存活、发育、稳态以及功能维持中发挥关键作用，各种细胞均保持较低水平的自噬活性。自噬在T细胞发育和存活中是必不可少的，但在CD8+细胞毒T细胞（CTL）杀伤功能中的作用尚不清楚。本项目采用Atg3基因条件性敲除的小鼠模型，观察自噬对CTL杀伤活性的调控作用，并进一步探讨自噬在颗粒酶/穿孔素介导、Fas配体（FasL）介导的杀伤途径中的作用环节。初步实验结果显示，Atg3缺陷的CTL体外特异性和非特异杀伤活性均明显高于对照CTL，并且Atg3缺陷的CTL细胞内颗粒酶的蛋白水平高于对照CTL。最新研究发现自噬缺陷可能是Crohn's病的主要病因，我们亦探讨自噬缺陷的CTL在Crohn's病发病机制中的作用。该项目的完成有助于揭示自噬在CTL杀伤功能中的作用及机制，并为明确Crohn's病的致病机制提出新观点，可能为疾病治疗提供新靶点。

结论摘要：

自噬在细胞存活、发育、稳态以及功能维持中发挥关键作用，但其在CD8+ CTL杀伤功能中的作用尚不清楚。我们发现自噬缺陷的CD8+T细胞活化后具有野生型细胞更强的杀伤活性，包括体内杀伤和体外杀伤，特异性杀伤和非特异性杀伤。该杀伤活性主要由穿孔素/颗粒酶介导，自噬缺陷CTL表达更高水平的穿孔素和颗粒酶B。体内实验表明自噬缺陷CTL具有更强的抗肿瘤活性，约有30%小鼠出现肿瘤消退。分子机制研究发现，自噬缺陷的CD8+T细胞易于被抗原活化，表现为活化marker增高、增殖加快以及IFN-γ合成增加。活化过程中Rac1和Rac2能结合SQSTM1/p62，从而发生降解，而自噬缺陷则抑制Rac降解。干扰Rac表达则明显抑制CTL杀伤活性和CD8+T细胞的活化，因此自噬可能通过促进Rac的降解，将CD8+T细胞的活化控制在合适程度。此外，自噬缺陷的Crohn’s病患者来源的外周血CTL表现出更强的非特异杀伤活性，而且Crohn’s病患者和健康人肠道组织染色结果提示穿孔素/颗粒酶B的表达水平和LC3荧光强度呈反比，与p62表达水平则呈正比，表明自噬缺陷CTL在Crohn’s病发病机制中发挥作用。该项目为CTL抗肿瘤作用和Crohn’s病的治疗方案提供新思路。