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中文摘要：
为了构建珍珠鸡MHC Ⅰ轻链β2m成熟肽基因的原核表达载体并在大肠杆菌中实现可溶性的表达，采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法从鸡脾脏中提取总RNA，以总RNA为模板，5’-ATC TAG AGG TAC CGG ATC C-CT）^15-3＇为反转录引物，采用TaKaRaAMV反转录酶合成First—strand cDNA（fcDNA）。根据GenBank中登录的鸡的β2m基因序列，设计了分别含EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点的一对引物，分别扩增鸡β2m的成熟肽基因。PCR产物经纯化回收后，插入到舍LacZ基因的原核克隆载体pGEM—T Easy中，转化至大肠杆菌JM109感受态细胞，经EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切及PCR鉴定，筛选出阳性克隆。再把所克隆的片断亚克隆到表达载体pMAL—p2X，构建重组表达质粒p2X-β2m。将重组表达质粒转化人大肠杆菌E．coli TBI感受态细胞，筛选阳性克隆。经IPTG诱导表达后．进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析。结果表明，本研究克隆了鸡β2m成熟肽基因序列。全长约297bp，编码约98个氯基酸，并可溶性表达了鸡β2m成熟肽蛋白质分子。采用淀粉树脂柱亲和层析和DEAE凝胶过滤方法对表达产物进行了纯化．并对纯化的表达产物进行了Western blot鉴定。本研究为进一步利用BF2的胞外区在体外共同构建MHC Ⅰ类分子结合筛选抗原表位肽平台奠定了基础。
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Structures and homology modeling of chicken major histocompatibility complex protein class I (BF2 an
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