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影响生长抑素重组质粒pEGS/2SS转染HeLa细胞效果的因素研究
  • ISSN号:0366-6964
  • 期刊名称:畜牧兽医学报
  • 时间:0
  • 页码:279-285
  • 语言:中文
  • 分类:S813.1[农业科学—畜牧学;农业科学—畜牧兽医] Q343[生物学—遗传学]
  • 作者机构:[1]南京农业大学动物科技学院,南京210095, [2]江苏省农业科学院畜牧研究所,南京210014, [3]华中农业大学动物科技学院,武汉430070, [4]中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193
  • 相关基金:国家自然科学基金(30771549)
  • 相关项目:卵泡抑制素新型基因疫苗构建与鉴定及作用机制研究
中文摘要:

旨在分析生长抑素重组质粒pEGS/2SS转染HeLa细胞(人宫颈癌上皮细胞)转染效果的影响因素,探讨最佳转染条件,为进一步研究生长抑素基因疫苗的作用机制和作用效果奠定基础。以脂质体转染法将带有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的重组质粒pEGS/2SS转染HeLa细胞,探讨质粒转染HeLa细胞最佳条件的4个参数:质粒DNA剂量、脂质体剂量、最佳转染时间和质粒提取方法,在荧光显微镜下观察细胞转染情况并计算转染率。结果:在六孔细胞培养板上,当DNA/脂质体剂量为1μg/6μg时,转染效率最高,在转染后72h达到34.02%;当用PlasmidMaxiKit试剂盒提取质粒,转染时间为48h,转染效率最高,达到17.88%。重组质粒pEGS/2SS转染He—La细胞条件是:采用试剂盒(Plasmid MaxiKit)提取的质粒,DNA和脂质体的剂量分别为1μg与6μg,转染时间48h,此时的转染效率最高,达17.88%。

英文摘要:

We aimed to investigate the factors infecting transfection efficiency of somatostatin recombinant plasmid pEGS/2SS introducting into HeLa cells, make preparations for advanced study on somatostatin gene vaccine mechanism and effect of action. Four parameters including transfeetion reagent (lipofectamineTM) concentration, DNA concentration, cells cultured time after transfection and DNA extracting techniques were analyzed and optimized, and transfeetion effi- ciency was evaluated by the percentage of transfected cells with green fluorescence under fluorescence microscope. Based on the optimized lipofectamineTM and DNA concentration, 34. 02% transfected HeLa cells could express green fluorescence 72 h after transfection when the concentration of lipofeetamineTM and DNA was individually 6μg and 1μg; Based on the optimized cells cultured time after transfection and DNA extracting techniques, 17.88% transfeeted HeLa cells could express green fluorescence protein with Plasmid Maxi Kit extracting DNA 48 h after trasfection. Optimal transfection conditions were determined with four parameters, 17.88% HeLa cells could express green fluorescence protein with Plasmid Maxi Kit extracting DNA, 1μg DNA and 6μg lipofectamineTM 48 h after transfection. K

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期刊信息
  • 《畜牧兽医学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国畜牧兽医学会
  • 主编:文杰
  • 地址:北京海淀区圆明园西路2号中国农科院畜牧所
  • 邮编:100193
  • 邮箱:xmsyxb@263.net
  • 电话:010-62815987 62816996
  • 国际标准刊号:ISSN:0366-6964
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1985/S
  • 邮发代号:82-453
  • 获奖情况:
  • 1992年北京优秀期刊奖,1998年、2000年在全国畜牧兽医优秀期刊评比中获一等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,美国剑桥科学文摘,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),瑞典开放获取期刊指南,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:21857