中文摘要：

目的：运用CRISPR/Cas9基因编辑技术，在人恶性横纹肌样瘤细胞株G401中敲除p21基因。方法通过反转录定量PCR（RT-qPCR）及Western blot检测各瘤细胞株中p21的表达，针对p21基因作用的功能域，设计了靶向人p21基因第3个外显子的向导RNA（sgRNA），克隆入lentiCRISPR v2载体。将测序及酶切鉴定正确的重组质粒在293T工具细胞中制备慢病毒颗粒并感染G401细胞，使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选，显微镜下挑取单克隆细胞团并继续培养获得G401单克隆细胞株。提取单克隆细胞株RNA及蛋白，利用RT-qPCR及Western blot方法检测细胞株中p21的敲除效果。结果 p21在人横纹肌样瘤细胞中高表达。成功构建靶向p21基因的lentiCRISPR v2-sgRNA重组慢病毒质粒。与对照组相比，筛选得到的G401亚克隆细胞系中p21蛋白表达缺失。结论针对难转染的G401细胞，应用CRISPR/Cas9系统成功构建了p21基因敲除的稳定株，为后续深入研究p21在人恶性横纹肌样瘤中的作用机制奠定了基础。