中文摘要：

目的：建立长期传代、形态和生物学特性稳定的永生化HSC。方法：采用PronaseE、Ⅳ型胶原酶原位灌流消化及Nycodenz密度梯度离心分离大鼠原代肝星状细胞（HSC），并进行免疫组化SABC法鉴定和培养。用Effectene Transfection Reagent方法将携带SV40LTag基因的质粒PSV3neo（该质粒由意大利学者Giovanni Gaudino PhD惠赠）转染第1代HSC，以G418筛选直至获得阳性克隆细胞，经体外长期培养和传代后，以PCR方法检测其SV40LT抗原mRNA的表达，观察细胞形态学，绘制细胞生长曲线，MTT法检测细胞增殖能力，用免疫组化SABC法对α—SMA、SV40LTag、Ⅰ、Ⅲ型胶原（collagen Ⅰ、collagenⅢ）、desmin、转化生长因子-β1（TGF—β1）、血小板衍生的生长因子受体β型（PDGFRβ）进行免疫细胞化学检测，用β—actin做半定量RT—PCR检测Ⅰ型胶原的表达，对其生物学特性进行研究。结果：本研究通过使用质粒PSV3neo转染正常大鼠HSC，经20d抗性筛选，获得G418阳性克隆细胞，长期传代后细胞形态和结构保持完好，SV40LTagmRNA的表达检测和免疫组化染色结果阳性，经扩大筛选培养，该HSC细胞系目前已传了50代，保持着星形外观的HSC形态学特征，生长曲线显示转染阳性细胞倍增速度快，MTT法测定570nm波长下A值显著高于对照组（P〈0．01）。半定量RT—PCR法检测collagen Ⅰ mRNA的表达明显高于对照组（P〈0．01）。免疫组化染色显示能表达α—SMA、collagenⅠ、collagenⅢ、desmin、TGF—β1、PDGFRβ。结论：利用SV40LTag基因序列诱导建立了永生化大鼠HSC系，新建HSC系在体外可长期传代，倍增速度快，其形态和生物学特性与原代HSC形态相似。