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Heterologous gene expression driven by carbonic anhydrase gene promoter in Dunaliella salina
  • ISSN号:0254-4059
  • 期刊名称:《中国海洋湖沼学报:英文版》
  • 时间:0
  • 分类:P731.12[天文地球—海洋科学]
  • 作者机构:[1]Medical College, Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China
  • 相关基金:Supported by National High-Tech Research and Development Program of China (863 Program, No. 2002AA628050) and National Natural Science Foundation of China (No. 30270031).
中文摘要:

Dunaliella 盐咸滩,一个光圈没有一面僵硬房间墙的容忍的单细胞的绿水藻,能住在从 0.05 ~ 5 mol/L NaCl 的咸度。这些特征 ofD。盐咸滩为抗体的生产使它成为一位理想的主人,口头的疫苗,;商业地珍贵的多肽。生产 heterologous 蛋白质 fromD 的高水平。盐咸滩,高度有效的倡导者被要求在控制状况下面驾驶目标基因的表示。在现在的学习,我们从碳的 anhydrase (CAH ) 克隆 1.4 kb 的 5 ′ franking 区域基因 ofD。由 genomic 走的盐咸滩;PCR。碎片被绑扎到 pMD18-T 向量;描绘。顺序分析显示这个区域包含了保存主题,包括一个 TATA- 相似盒子;CAAT 盒子。有 transcriptional 的一个潜在的角色的双人脚踏车(GT ) n 重复控制,也在这个区域被发现。theCAH 基因的抄写开始地点(TSS ) 被 5 ′种族决定;嵌套的 PCR 方法。转变试金证明 1.4 kb 碎片能驾驶可选的工具条(bialaphos 抵抗) 的表示基因当熔化在狐被转变时。由 biolistics 的盐咸滩。北弄污杂交证明酒吧抄本很充满在 2 mol/L NaCl 种的房间,;不太充满 0.5 mol/L NaCl,显示酒吧基因的那表情在高咸度被导致。这些结果建议 theCAH 基因倡导者的潜在的使用导致 heterologous 基因 inD 的表示。在改变的盐状况下面的盐咸滩。

英文摘要:

Dunaliella salina, a halotolerant unicellular green alga without a rigid cell wall, can live in salinities ranging from 0.05 to 5 mol/L NaC1. These features of D. salina make it an ideal host for the production of antibodies, oral vaccine, and commercially valuable polypeptides. To produce high level of heterologous proteins from D. salina, highly efficient promoters are required to drive expression of target genes under controlled condition. In the present study, we cloned a 5' franking region of 1.4 kb from the carbonic anhydrase (CAH) gene ofD. salina by genomic walking and PCR. The fragment was ligated to the pMD18-T vector and characterized. Sequence analysis indicated that this region contained conserved motifs, including a TATA- like box and CAAT-box. Tandem (GT)n repeats that had a potential role of transcriptional control, were also found in this region. The transcription start site (TSS) of the CAH gene was determined by 5' RACE and nested PCR method. Transformation assays showed that the 1.4 kb fragment was able to drive expression of the selectable bar (bialaphos resistance) gene when the fusion was transformed into D. salina by biolistics. Northern blotting hybridizations showed that the bar transcript was most abundant in cells grown in 2 mol/L NaCl, and less abundant in 0.5 mol/L NaCl, indicating that expression of the bar gene was induced at high salinity. These results suggest the potential use of the CAH gene promoter to induce the expression of heterologous genes in D. salina under varied salt condition.

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期刊信息
  • 《中国海洋湖沼学报:英文版》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国科学院 中国科协
  • 主办单位:中国海洋与湖沼学会
  • 主编:曾呈奎
  • 地址:中国青岛南海路7号
  • 邮编:266071
  • 邮箱:cjol@ms.qdio.ac.cn
  • 电话:0532-82898754
  • 国际标准刊号:ISSN:0254-4059
  • 国内统一刊号:ISSN:37-1150/P
  • 邮发代号:2-581
  • 获奖情况:
  • 第一、二届全国优秀科技期刊二等奖,中科院优秀期刊二等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,荷兰文摘与引文数据库,美国地质文献预评数据库,美国剑桥科学文摘,美国科学引文索引(扩展库),美国生物科学数据库,英国科学文摘数据库,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊
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