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渗透胁迫相关基因高通量筛选技术体系的建立
  • ISSN号:1671-8135
  • 期刊名称:《中国生物工程杂志》
  • 时间:0
  • 分类:Q943.2[生物学—植物学] TQ426.6[化学工程]
  • 作者机构:[1]东北农业大学生命科学学院,哈尔滨150030
  • 相关基金:国家科技部重大基础研究前期研究专项(2003CCA03500)、国家自然科学基金(30570990)、黑龙江省科技厅重大攻关项目(GA068103)资助项目
中文摘要:

随着功能基因组学的发展,在基因组水平上获得了大量渗透胁迫相关基因。农杆菌介导的超量表达是筛选和鉴定这些基因功能最为常用的技术。以植物表达载体pBI121为基础,在不改变其氨基酸序列的基础上通过定点突变消除了其上与质粒复制和稳定性有关的trfA基因(X00713)内部的SfiⅠ酶切位点,并在表达单元CaMV35s启动子和NOS终止子之间引入了SfiⅠA和SfiIB位点,改造成通用植物表达载体卡盒pBHT-5。该载体卡盒可直接用于连接Clontech SMART^TM技术构建的cDNA文库,提高了大规模构建cDNA文库基因植物表达载体的工作效率。为高通量的筛选与鉴定基因功能,从大量的渗透胁迫相关基因中筛选出具有独立知识产权的、对植物抗渗透胁迫起重要作用的新基因奠定了坚实的基础。

英文摘要:

With the development of functional genomics, high throughput analysis of genes' function has been the mainstream of research, and exogenous gene's over expression via Agrobacterium-mediated transformation is the most commonly used method in gene functional analysis. The versatile plant expression vector cassette named pBHT-5 was constructed by the method of site-specific mutagenesis based on pBI121. First of all, the restriction enzyme SfiI recognition site in trfA gene (X00713) which was relevant to plasmid replication and stability was replaced without changing its amino acid composition. And then the SfiIA, SfiIB sites were added between promoter CaMV35s and terminator NOS. The versatile plant expression vector used to construct plant expression vector containing the full- length genes cloned technology, which will raise the efficiency of vector construction. The result will provide te can be directly ontech SMARTTM basis of new genes' high throughput screening and functional analysis, then get the new genes functioning in plant osmotic stress resistance.

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期刊信息
  • 《中国生物工程杂志》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国科学院文献情报中心 中国生物技术发展中心 中国生物工程学会
  • 主编:张树庸
  • 地址:北京市中关村北四环西路33号
  • 邮编:100080
  • 邮箱:biotech@mail.las.ac.cn
  • 电话:010-82624544 82626611-6631
  • 国际标准刊号:ISSN:1671-8135
  • 国内统一刊号:ISSN:11-4816/Q
  • 邮发代号:82-673
  • 获奖情况:
  • 1991年中国科学院科技进步三等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:12959