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猪瘟病毒C株截短E2基因在大肠杆菌中表达及免疫原性初步检测
  • ISSN号:1671-7236
  • 期刊名称:中国畜牧兽医
  • 时间:2014
  • 页码:12-16
  • 分类:Q786[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]华南农业大学兽医学院,广东广州510642
  • 相关基金:基金项目:公益性行业(农业)科研专项(201203056);国家基金面上项目(31172321);广东省高等学校科技创新(重点)项目(2012CXZD0013).
  • 相关项目:猪免疫识别信号途径RIG-I的分子作用及其在猪瘟病毒感染中的免疫调控机制研究
中文摘要:

本试验利用PCR技术,扩增得到猪瘟病毒(CSFV)C株E2基因的主要抗原片段A/D区549bp,将其酶切纯化后,与已酶切纯化的pET-32a进行16℃过夜连接,转化大肠杆菌BL21。从转化成功的氨苄培养板挑取合适菌落进行PCR,挑取目的条带正确的菌落加至LB培养基进行过夜培养后送测序。将测序正确的菌液划板,挑菌培养并用IPTG进行诱导表达。得到的蛋白进行SDS-PAGE,在约39ku位置有蛋白条带。将蛋白纯化后,分别利用自制兔抗CSFV阳性血清及临床检测阳性的猪抗CSFV阳性血清进行Westernblotting检测,可见在39ku处有单一条带,表明表达的蛋白具有免疫原性。本试验结果为下一步ELSIA试剂盒的组装奠定基础,方便对猪场免疫猪群猪瘟抗体水平进行监控。

英文摘要:

A truncated gene encoding the A/D antigenic domains (549 bp) of E2 in classical swine fever virus (CSFV) was amplified by RT PCR from the genomic RNA of CSFV C strain, cloned into pET 32a expression vector to obtain recombinant pET-32a-CSFV-E2, and then sequenced. The result was the right interested gene. The recombinant plasmid was transformed in- to BL21 and induced with isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG). After expression,we could see our target band about 39 ku with SDS-PAGE. To purify the His-trap protein in different conditions,and we could get the best one with the most produc- tive target protein. Western blotting indicated that the expressed antigen protein could be recognized by the positive sera of CS FV (the sera from our homemade anti rabbit one and the clinical swine one). It would benefit the creation of ELISA kit and re- search on the antibody levels of pigs.

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期刊信息
  • 《中国畜牧兽医》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中华人民共和国农业部
  • 主办单位:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
  • 主编:李琍
  • 地址:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
  • 邮编:100193
  • 邮箱:zgxmsy@caas.cn
  • 电话:010-62816020 62811226 62810371
  • 国际标准刊号:ISSN:1671-7236
  • 国内统一刊号:ISSN:11-4843/S
  • 邮发代号:2-215
  • 获奖情况:
  • 1996年被农业部评为“95中国出版成就展”参展期刊...,1998年在首届全国畜牧兽医优秀科技期刊评比中总分...,2002年被中国期刊协会农业期刊分会和中国农学会评...
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:22619