中文摘要：

目的通过观察乙酰肝素酶（HPA）抑制剂对子宫颈癌HeLa细胞体外生长的抑制作用及HPA表达的影响，为子宫颈癌HPA分子靶向治疗提供理论依据。方法优化设计并合成了两个系列共13种1，3-O，N螺杂环类化合物，产品编号为10～22号，其中21号为HPA抑制剂——DMB0化合物，余12种为新合成的化合物。其中，1个系列含甲氧苯基，产品编号为10-14号；另1个系列不含甲氧苯基，产品编号为15～22号。（1）采用乙酰肝素降解检测试剂盒检测新合成的化合物（选择与DMBO结构类似度高的6个化合物，即14、15、16、20、21、22号化合物）对HPA活性的作用，以50％抑制浓度（IC50）表示作用的强弱；（2）四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测新合成的化合物（7个化合物，即11、12、14、15、16、20、22号化合物）作用后HeLa细胞生长的抑制作用，选择抑制作用最大的化合物（即16号化合物）用于以下实验；（3）细胞划痕实验观察16号化合物作用后HeLa细胞迁移能力的变化；（4）流式细胞仪检测16号化合物作用后HeLa细胞的细胞周期比例和细胞凋亡率的变化；（5）实时定量逆转录（RT）-PCR技术、蛋白印迹法和免疫组化法检测16号化合物作用后HeLa细胞中HPAmRNA和蛋白表达的变化。结果（1）6个新合成的化合物（即14、15、16、20、21、22号化合物）对HPA活性均有不同程度的抑制作用，除22号化合物抑制作用不明显无法测出IC50值外，14、15、16、20、21号化合物的Ic，。值分别为4．47、21．81、8．36、14．13、47．19μmoFL。（2）MTT比色法检测显示，不同浓度（分别为1、5、15、30、60、120、180、240μmol／L）的7个新合成的化合物（即11、12、14、15、16、20、22号化合物）作用48h对HeLa细胞的生长均有抑制作用，并呈明显的浓度依赖性（P〈0．01），其中16号化合物的抑制效果最显著（IC50值为48．16μmoFL）

英文摘要：

Objective To provide the theoretical supportting for targeted heparanase （HPA） inhibition of cervical cancer through observing the anti-proliferative effect of the HPA inhibitor on HeLa cell line of cervical cancer. Methods The two series of 13 kinds of novel HPA inhibitors were synthesized and optimized. Heparan degrading enzyme assay kit was used to test the effect of the inhibitors on the inhibition of HPA enzyme activity. Methyl thiazolyl tetrazolium （MTT） method and scratch test were used to observe the anti-proliferative and the migration effect of the inhibitors on HeLa cells. Flow eytometry was performed to determine the cell cycles and apoptosis. The expression of HPA was evaluated by reverse transcription （RT）- PCR, western blot and immunoeytoehemistry. Results All tested inhibitors could inhibit the activity of HPA enzyme [the range of 50% inhibiting concentration （IC50） values from 4.47 to 47.19 μmol/L] and the growth of HeLa cells （the range of IC50 values from 48.16 to 96.64 μmol/L）. Among them, No.16 compound exhibits the strongest inhibition against the growth of HeLa, which could arrest the cell into G0/G1 and GJM phases. The rate of cell apoptosis in the group treated with 50 μmol/L No. 16 for 48 hours [（11.9± 1.2）%] was significantly higher than that [（6.6±1.8）%] in untreated group （P=0.013）. Real time PCR and western blot showed that expression levels of HPA mRNA （1.23±0.46） and protein （0.46±0.31） significantly decreased in the treated group as compared with the levels of HPA mRNA （3.43±0.45） and protein （1.30±0.58） in the untreated group （both P〈0.05）. Immunoeytochemistry also showed that the treatment of No. 16 significantly reduced the average optical density （0.39±0.04） of HPA immuostaining signal compared with that in the control group （0.50±0.09; P=0.026）. Conclusion Novel 1,3-O,N spiroheterocyclic HPA inhibitors could inhibit the proliferation of HeLa cells, inhibit the HPA enzyme activity in different degree, and