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吕氏泰勒虫cDNA表达文库的构建及其抗原基因的免疫筛选
  • ISSN号:0578-1752
  • 期刊名称:《中国农业科学》
  • 时间:0
  • 分类:S513.032[农业科学—作物学] Q343.1[生物学—遗传学]
  • 作者机构:[1]中国农业科学院兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物国家重点实验室、甘肃省动物寄生虫病重点实验室,兰州730046
  • 相关基金:国家自然资源平台项目(2005DKA21100);国家自然科学基金项目(30571397,30800820);国家“863”项目(2006AA10A207);支撑计划(2007BAD40800);国家重点试验室自主申请项目(SKLVEB2008ZZKT019):中央级公益性科研院所基本科研业务项目(BRF080303);甘肃省重大专项(0801NKDA033);中国欧盟合作项目专项
中文摘要:

【目的】构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,并从中筛选抗原候选基因。[方法]从吕氏泰勒虫裂殖子直接提取和纯化mRNA,采用o1igo(dT)引物合成双链cDNA,并在其两端加如EcoRI/Hind III定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRI/Hind III粘性末端的入SCREEN载体的两臂之间。用PhageMaker extract对连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,并用之转染大肠杆菌ER1647,从而构建成吕氏泰勒虫的cDNA表达文库。用吕氏泰勒虫阳性血清和兔抗绵羊IgG-AP筛选得到阳性克隆,经测序和Blast软件分析并获得新基因。【结果】成功构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,其初级库容量约为1.0×10^6PFU,扩增文库的滴度为8.2×10^8PFU·ml^-1,文库重组率为100%;通过免疫学筛选、测序和Blast软件分析,共获得30个新基因,其中15个基因已登录GenBank/NCBI。[结论]为研究泰勒虫疫苗、新型医药和诊断抗原,以及发展可持续性防制羊泰勒虫病提供基本材料。

英文摘要:

[objective] A cDNA expression library of the merozoites of Theileria luwenshuni was successfully constructed and antigenic genes were obtained by immunoscreening from it. [Method] Purified mRNA was isolated from the merozoites of Theileria luwenshuni. A library of oligo (dT) -primed cDNA with added directional EcoR I IHindlII linkers was constructed and ligated to the EcoR I/Hind III arms of the screen vector. The recombinant phage DNA was packaged by using PhageMaker packaging extracts, resulting in a primary cDNA library. The positive clones were immunoscreened with the positive sera against Theileria luwenshuni and the rabbit anti-sheep IgG-AP from the library. The new genes were obtained by Blast anlysis and sequencing. [Result] A cDNA expression library of the merozoites of Theileria luwenshuni was successfully constructed, with a size of 1.0 ×10^6 PFU, amplified cDNA library with a phage titer of 8.2 ×10^8 PFU·ml^-1 , and a recombinant rate of 100%. Thirty new genes were obtained by analysis of immunoscreening, sequencing and Blast, and 15 of them have been submitted in GenBank/NCBI. [ Conclusion] The experiment has established an important material bases for the development of Theileria vaccine, new pattern medicine, diagnostic antigen and so on.

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期刊信息
  • 《中国农业科学》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中华人民共和国农业部
  • 主办单位:中国农业科学院 中国农学会
  • 主编:万建民
  • 地址:北京中关村南大街12号中国农业科学院图书馆楼4101-4103室
  • 邮编:100081
  • 邮箱:zgnykx@caas.cn
  • 电话:010-82109808 82106279
  • 国际标准刊号:ISSN:0578-1752
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1328/S
  • 邮发代号:2-138
  • 获奖情况:
  • 中国期刊方阵“双高”期刊,第三届中国出版政府奖提名奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),英国食品科技文摘,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:85620