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百脉根AD-cDNA文库的构建及与结瘤因子受体NFR1相互作用蛋白的鉴定
  • ISSN号:1000-2421
  • 期刊名称:《华中农业大学学报》
  • 时间:0
  • 分类:S154.381[农业科学—土壤学;农业科学—农业基础科学] Q785[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室,武汉430070
  • 相关基金:国家自然科学基金项目(30570056)资助
中文摘要:

以豆科植物百脉根为材料,构建了AD-cDNA表达文库。其库容量达到每3μg DNA 2×10^6酵母转化子,空载率为12.5%,平均片段长度为1.5 kb。以百脉根结瘤因子受体激酶基因1(nod factor receptor kinase,NFR1)蛋白激酶结构域的DNA片段(NFR1-PK)为诱饵,利用酵母双杂技术,筛选与NFR1相互作用的基因。结果在含X-gal的四缺选择性培养基上筛选到120个克隆。经质粒抽取、PCR鉴定、回转酵母验证得到80个阳性克隆。对26个确定阳性克隆的外源片段进行测序和同源性分析,通过NCBI数据库比对分析鉴定含有JAB1、AT-RICH结构域等4个与NFR1-PK相互作用的不同基因。通过半定量RT-PCR观察在百脉根中这些基因的表达情况,其结果可为进一步研究NFR1基因的功能和调控机制提供材料。

英文摘要:

An AD-cDNA library was constructed by using materials from legume Lotus japonicus. The library transformation efficiency is 2 × 10^6 transformants per 3 μg DNA, the empty transformants without cDNA insert is 12.5% of total transformants. The library was screened with the protein kinase domain of NFR1 (NFR1-PK) as bait by yeast two hybrid approach and 120 positive clones were selected on SD/-Leu-Trp-His-Ade plates containing X-gal. 80 clones were further confirmed by rescuing the plasmid from yeast, amplifying the DNA insert by PCR and retesting the phenotype. The positive clones were sequenced and searched for NCBI database by blast analysis. 4 genes interacted with NFR1-PK including JAB1 and ARID domain (AT-rich interacting domain). To determine the expression of these genes in Lotus japonicus, the RT-PCR products of these genes were analyzed in different tissues. The result provided basis to study NFR1 function in Nod factor signal transduction.

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期刊信息
  • 《华中农业大学学报》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中华人民共和国教育部
  • 主办单位:华中农业大学
  • 主编:张献龙
  • 地址:武汉洪山区狮子山街1号
  • 邮编:430070
  • 邮箱:hnlkxb@mail.hzau.edu.cn
  • 电话:027-87287364
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-2421
  • 国内统一刊号:ISSN:42-1181/S
  • 邮发代号:38-120
  • 获奖情况:
  • 1997年,获第二届全国优秀科技期刊二等奖,1999年,获全国高校自然科学学报及教育部优秀期刊...,2001年,选入新闻出版署期刊方阵“双百”期刊,连续三次入选教育部中国高校精品科技期刊,2009年,获全车高校科技期刊优秀编辑质量奖,2010年,被评为湖北省十大有影响学术期刊(自然科...,2012年获“第四届中国高校优秀科技期刊奖”及“第...
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
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