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鸡干扰素α1及胸腺肽α1融合蛋白原核表达系统的建立
  • ISSN号:1005-4545
  • 期刊名称:《中国兽医学报》
  • 时间:0
  • 分类:S831[农业科学—畜牧学;农业科学—畜牧兽医]
  • 作者机构:[1]吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(30740058)
中文摘要:

根据GenBank已发表的鸡干扰素α1(IFNα1)基因序列.设计1对特异性引物,采用PCR方法,从鸡基因组中扩增出鸡IFNα1基因。根据胸腺肽α1(THYα1)氨基酸序列,选用大肠杆菌偏爱密码子.设计基因序列,同时在IFNα1-THYα1之间设计1个5肽Linker。在IFNα1基因结构基础上.设计4条寡核苷酸单链作为下游引物.以搭桥的方式延伸和扩增,最终获得IFNα1-THYα1融合基因;将该基因克隆至pGEX4T-1载体后,转化至BL21(DE3)受体菌中,37℃培养至菌液D600为0.6~1.0时,IPTG(1.0mmol/L)诱导培养4h;经western Blot鏊定证实,成功构建了鸡干扰素α1及胸腺肽α1融合蛋白原核表达系统,表达产物以包涵体形式存在.获得高纯度的IFNα1—THYα1蛋白。以细胞痛变抑制试验及E玫瑰花结形成试验对目的蛋白进行体外活性检测.结果显示该蛋白具有生物活性。

英文摘要:

Accoding to the published genic sequences of chicken interferon-α1 ,a pair of specific primers was de signed to amplified the genc of chicken interferon-α1 by polymerase chain reaction (PCR) from the complete genome of chicken. Based on IFN α1 amino acid sequence and the choice of E. coli preference for the codon, we designed a linker of 5 peptides between IFN aland THY α1 and four oligonucleotide single chains as downszream primers. The IFN α1-THY α1 fusion gene was ohlained by PCR. The fusion gene was cloned into pGEX1T -1 expression plasmid and then transformed into BL21(DE3),cultured in liquid LB at 37℃ and induced with IPTG for 4 hours while its D600 got up to 0.6-1.0. Western blot results indicated that the chicken IFNα1 -THYα1 fusion protein have been successfully expressed and the product of expression exists as the form of inclusion. The high-purity of IFNα1 THYα1 protein was obtained and the activity in vitro of the purposed protein was detected with the cytopathogenic effect inhibition test and E rosette forming assay. The results proved that the protein possess the biological activity.

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期刊信息
  • 《中国兽医学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中华人民共和国教育部
  • 主办单位:吉林大学
  • 主编:王哲
  • 地址:吉林省长春市西安大路5333号
  • 邮编:130062
  • 邮箱:xbcjvs@163.com
  • 电话:0431-87836531 87836534
  • 国际标准刊号:ISSN:1005-4545
  • 国内统一刊号:ISSN:22-1234/R
  • 邮发代号:12-105
  • 获奖情况:
  • 第二届全国优秀科技期刊评比二等奖,连续多次被评为全军优秀医学期刊一等奖,全国高校优秀自然科学学报评比一等奖,中国期刊方阵“双百”期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:18973