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长距离反向PCR技术高效扩增已知DNA片断的侧翼序列
  • ISSN号:1007-7146
  • 期刊名称:《激光生物学报》
  • 时间:0
  • 分类:Q78[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]安徽大学生命科学学院、安徽省生态工程与生物技术省级重点实验室,安徽合肥230039
  • 相关基金:国家自然科学基金(30370045,30470056);教育部科技重点课题(204064);安徽省优秀青年基金(04043048);安徽大学211工程学术创新团队资助项目(02203109)
中文摘要:

为解决传统反向PCR技术扩增片段短、假阳性多的不足,建立了长距离反向PCR(LDI-PCR)扩增技术:O.5μg DNA/mL的反应体系使DNA酶解片段充分自身环化连接,其产物用25nt~30nt的序列特异引物进行长距离PCR。结果表明该方法能特异地扩增出长达16kh的序列,在已知DNA片段的侧翼序列克隆方面具有高效、简便、特异的优点。

英文摘要:

To avoid the disadvantages of conventional inverse PCR such as short amplification fragments and pseudopositive products, the long distance-inverse PCR (LD-IPCR) technique was set up as follows. In a 1 mL reaction system, 0.5μg of DNA fragments excised by a single restriction enzyme was adequately self-looped and ligated. Then the reaction products were used as the templates for LD-IPCR amplification using specific inverse primer pairs of 25 - 30 nucleotides. It was proven that this modified technique could successfully make it more efficient, convenient as well as more specific in cloning the flanking sequences adjacent to DNA fragments obtained. The flanking sequence amplified by LD-IPCR could reach 16 kb in length.

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期刊信息
  • 《激光生物学报》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国遗传学会
  • 主编:胡能书
  • 地址:长沙市麓山路36号湖南师范大学生命科学学院内
  • 邮编:410081
  • 邮箱:jgswxb@hunnu.edu.cn
  • 电话:0731-8872208
  • 国际标准刊号:ISSN:1007-7146
  • 国内统一刊号:ISSN:43-1264/Q
  • 邮发代号:42-194
  • 获奖情况:
  • 2000年12月荣获首届《CAI-CD》执行优秀奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),中国中国科技核心期刊
  • 被引量:5516