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杜氏盐藻叶绿体转化载体pchlN-CAT-BAR的构建
  • ISSN号:1671-6825
  • 期刊名称:《郑州大学学报:医学版》
  • 时间:0
  • 分类:Q782[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]郑州大学生物工程系细胞生物学研究室,郑州 450001, [2]郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,郑州 450001
  • 相关基金:科技部国际科技合作项目2007DFA01240; 国家自然科学基金资助项目30300208
中文摘要:

目的:利用同源重组方法将外源选择标记基因转入杜氏盐藻叶绿体中并表达。方法:以光非依赖性的原叶绿素酸酯还原酶chlN基因为同源片段,以氯霉素乙酰转移酶(cat)基因和除草剂草丁膦(PPT)抗性bar基因为选择标记,构建盐藻叶绿体转化载体pchlN-CAT-BAR,并通过基因枪法转入野生型盐藻细胞,筛选转化藻株。对转化株和野生对照组的细胞计数结果进行统计学分析。结果:在200mg/L氯霉素的选择下,野生型盐藻12d左右死亡,转化藻仍正常生长,再经4mg/LPPT继代筛选3~5代,得到表达氯霉素和PPT抗性的盐藻转化株。盐藻转化株和野生株1个月内藻株生长差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:以chlN基因作为同源片段构建盐藻叶绿体转化载体是可行的。

英文摘要:

Aim:To transfer and express exogenous selective mark genes in the chloroplast of Dunaliella salina(D. salina) by homologous recombination.Methods:By using chloramphenicol acetyltransferase gene(cat) and herbicide phosphinothricin(PPT)resistant gene(bar) as selective mark genes, and the chlN, one of light-independent protochlorophyllide reductase genes,as homologous segment, a transformation vector pchlN-CAT-BAR for the chloroplast of D.salina was constructed,and introduced into the wild type cells of D.salina by microprojectile delivery.Results: The transformants of D.salina survived under the selection pressure of chloramphenicol at 200 mg/L, while the wild type cells died about 12 days after the transformation.The stable transformants were obtained by the selection of 4 mg/L PPT for 3~5 generations.The statistical analysis showed that there was a significant difference in proliferation between transformants and wild-type cells of D.salina under the selected pressures(P0.05).Conclusion:It is available to construct transformation vector for D.salina chloroplast using the chlN gene as homologous segment.

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期刊信息
  • 《郑州大学学报:医学版》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:河南省教育厅
  • 主办单位:郑州大学
  • 主编:辛世俊
  • 地址:郑州市高新区科学大道100号
  • 邮编:450001
  • 邮箱:xzshi@126.com
  • 电话:0371-67781728
  • 国际标准刊号:ISSN:1671-6825
  • 国内统一刊号:ISSN:41-1340/R
  • 邮发代号:36-111
  • 获奖情况:
  • 综合性医药卫生类核心期刊,教育部优秀科技期刊一等奖,中国优秀科技期刊二等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),波兰哥白尼索引,美国剑桥科学文摘,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:15607