中文摘要：

目的：鉴定出丙型肝炎病毒（HCV）特异性HLA-A＊1101限制性和A＊2402限制性CD8＋T细胞表位.方法：采用T细胞表位预测软件SYFPEITHI预测HCV特异性CD8＋T细胞表位,合成HLA-A＊1101限制性、A＊2402限制性候选表位;建立永生化的HLA-A＊1101阳性、A＊2402阳性B细胞株,采用竞争性肽结合实验检测候选表位与HLA-A＊1101或A＊2402分子的结合力;候选表位体外分别刺激HLA-A＊1101阳性或A＊2402阳性HCV感染者外周血单个核细胞（PBMCs）后,采用酶联免疫斑点（ELISPOT）和细胞内细胞因子染色（ICS）实验分别检测肽特异性分泌γ-干扰素（IFN-γ）的细胞的水平和（肝） 异性IFN-γ＋CD8＋T细胞的水平.结果：5条HLA-A＊1101限制性候选表位中,NS3_609（ITLTHPITK）和NS2_165（VVFSDMETK）与HLA-A＊1101分子具有高结合力.3条HLA-A＊2402限制性候选表位中,NS3_373 （KCDELASKL）和NS5b_382 （YYLTRDPTI）与HLA-A＊2402具有高结合力;在HLA-A＊1101阳性HCV感染者PBMCs中存在NS3 609和NS2_165特异性分泌IFN-γ的CD8＋T细胞,而在HLA-A＊2402阳性HCV感染者PBMCs中存在NS3_373和NS5b 382特异性分泌IFN-γ的CD8＋T细胞.结论：本研究证实NS3_609（ITLTHPITK）和NS2_165（WFSDMETK）为全新的HCV特异性HLA-A＊1101限制性CD8＋T细胞表位,NS3_373 （KCDELASKL）和NS5b_382 （YYLTRDPTI）为全新的HCV特异性HLA-A＊2402限制性CD8＋T细胞表位.

英文摘要：

Objective：To identify hepatitis C virus （HCV）-specific HLA-A＊1101-and A＊2402-restricted CD8＋ T-cell epitopes.Methods：HCV-specific CD8＋ T-cell epitopes were predicted using T epitope prediction software （SYFPEITHI） and then HCV-specific HLA-A＊1101 and A＊2402-restricted epitope candidates were selected and synthesized.Immortalized HLA-A ＊1101-positive and A ＊2402-positive B cell lines were established.Based on above immortalized B cell lines,competitive peptide-binding assay was used to evaluate the binding affinity of epitope candidates for HLA-A＊1101 and A＊2402 molecules,respectively.Epitope candidates were used to stimulate PBMCs from HLA-A ＊1101-positive or A＊ 2402-positive HCV-infected patients.Enzyme-linked immunospot （ELISPOT） and intracellular cytokine staining （ICS） assay were applied to measure the frequencies of IFN-γ-secreting cells in total PBMCs and the percentages of IFN-γ＋ CD8＋ T cells in total CD8＋ T.Results：Of five HLA-A＊ 1101-restricted epitope candidates,NS3_ 609 （ITLTHPITK） and NS2 165 （VVFSDMETK） had _a high affinity for HLA-A＊ 1101 molecules.Among three HLA-A ＊2402-restricted epitope candidates,NS3 373 （KCDELASKL） and NS5b_382 （YYLTRDPTI） had a high affinity for HLA-A＊2402 molecules.Furthermore,high levels of NS3_609-and NS2_165-specific IFN-γ-secreting CD8＋T cells were detected in HLA-A＊1101-positive HCV-infected patients,whereas high levels of NS3_373-and NS5b_382-specific IFN-γ-secreting CD8＋ T cells were detected in HLA-A＊2402 positive HCV-infected patients.Conclusion：Our Results strongly confirmed that NS3_609 （ITLTHPITK） and NS2_165 （VVFSDMETK） are novel HCV-specific HLA-A＊ 1101-restricted CD8＋ T-cell epitopes while NS3_373 （KCDELASKL） and NS5b_382 （YYLTRDPTI） are novel HCV-specific HLA-A＊2402-restricted CD8＋ T-cell epitopes.