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栽培大豆Rubisco小亚基基因(rbcS)全长cDNA的克隆及原核表达
  • ISSN号:1007-9084
  • 期刊名称:中国油料作物学报
  • 时间:2014.6.25
  • 页码:329-333
  • 分类:Q785[生物学—分子生物学] S565.103[农业科学—作物学]
  • 作者机构:[1]吉林农业大学生命科学学院,吉林长春130118, [2]吉林农业大学农学院,吉林长春130118
  • 相关基金:国家自然科学基金(31171459); 吉林省自然科学基金(201215178)
  • 相关项目:不同年代大豆品种根系活力的变化及其与植株光合能力和产量关系的研究
中文摘要:

根据NCBI中发表的大豆Rubisco小亚基基因(rbcS)序列(AF303939-1)设计特异引物,以吉农13大豆为实验材料,采用Trizol法提取叶片总RNA,通过RT-PCR克隆大豆rbcS的cDNA。将该基因与原核表达载体pET-30a(+)连接,转化大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞,双酶切鉴定后筛选阳性克隆,测序结果显示:rbcS全长696bp,其中开放阅读框为537bp,编码178个氨基酸;选择含大豆rbcS cDNA阳性克隆菌液IPTG诱导,经SDSPAGE分析,诱导表达出分子量为29.1kDa的融合蛋白,表达产物大小与预计理论值相符。诱导7h蛋白表达量最高,为64.15%。

英文摘要:

The specific primers were designed for rbcS gene based on the published sequence ( AF303939 - 1 ) in NCBI. Total RNA was isolated using Trizol method from the seedling leaves of soybean variety Jinong 13 and the full length eDNA of rbcS was amplified by means of reverse transcription -polymerase chain reaction( RT -PCR). The amplified fragment was ligated to the prokaryotic expression vector pET - 30a( + ) and transformed into E. coli BL21 comi)etent cells. The positive clones were identified by double enzyme digestion. The sequencing results indi- cated that the complete cDNA sequence of rbcS gene was 696 bp with a 537 bp ORF ( open reading frame) and en- coded 178 amino acids. A 29.1 kDa fusion protein was expressed for rbcS by IPTG induction through SDS - PAGE analysis. The size of expression product matched with anticipated theoretical value. The protein expression quantity was maximum (64.15%) at 7 hour induction.

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期刊信息
  • 《中国油料作物学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国农科院油料作物研究所
  • 主办单位:中国农业科学院油料作物研究所
  • 主编:廖伯寿
  • 地址:湖北省武汉市武昌徐东二路2号油料所内
  • 邮编:430062
  • 邮箱:ylxb@oilcrops.cn
  • 电话:027-86813823
  • 国际标准刊号:ISSN:1007-9084
  • 国内统一刊号:ISSN:42-1429/S
  • 邮发代号:38-13
  • 获奖情况:
  • 分别于2008年、2011年和2014年连续三届被评为中国...,是北京大学2004-2014年《中文核心期刊要目总览》...,2016年版《中国科技期刊引证报告(核心版)》公布...
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:11301