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抗新型锌指蛋白ZBTB45单克隆抗体的制备与应用
  • ISSN号:0258-879X
  • 期刊名称:《第二军医大学学报》
  • 分类:R363[医药卫生—病理学;医药卫生—基础医学]
  • 作者机构:[1]第二军医大学基础部病理生理学教研室,上海200433, [2]大连医科大学病理生理学教研室,辽宁大连116044
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(No.81130084;No.31025013)
中文摘要:

目的:构建含锌指蛋白ZBTB20基因的重组腺病毒载体,以研究锌指蛋白ZBTB20的生物学功能。方法:将带有FLAG标签的ZBTB20的cDNA片段(ZBTB20-FLAG)克隆至pAdTrack-CMV载体,将该载体与pAdEasy质粒进行细菌内同源重组从而获得重组腺病毒载体pAd-ZBTB20,之后在293细胞中进行包装以及扩增,并对病毒滴度进行检测;采用肝脏组织特异性ZBTB20基因小鼠的原代肝细胞和肝脏组织模型,分别于离体和在体水平鉴定所制备的重组腺病毒Ad-ZBTB20介导的ZBTB20 蛋白的表达情况;并采用报告基因技术检测过表达的ZBTB20蛋白的功能活性。结果:成功制备了锌指蛋白ZBTB20重组腺病毒,该重组腺病毒感染原代肝细胞和小鼠肝脏组织能过表达ZBTB20蛋白,并且此ZBTB20蛋白能抑制其下游靶基因甲胎蛋白的转录。结论:所构建的ZBTB20重组腺病毒可以介导ZBTB20的过表达并具备转录调节活性,为今后研究ZBTB20的相关生物学功能奠定了基础。

英文摘要:

AIM: To construct the reeomlbinant adenovirus vector containing zinc finger protein ZBTB20 gene for the further study of the hiological function of ZBTB20. METHODS: The ZBTB20 cDNA fragment with FLAG tag was cloned into pAdTrack-CMV vector. The linearized vector was introduced into pAdEasy-1/BJ5183 bacterial cells for generaring homologous recombinant adenovirus plasmids, and was further transfeeted into HEK-293 packaging cells for the produetion of Ad-ZBTB20. The primary hepatocyles were used in the experimenh The expression anti activity of ZBTB20 prorein were determined hy Western blotting anti reporter gene assay alter Ad-ZBTB20 infection. The expression of ZBTB20 protein was also examined in the Liver tissue of liver-specific ZBTB20 knockout mice injected with Ad-ZBTB20 via the tail vein. RESULTS: Recombinant adenovirus Ad-ZBTB20 with high liter was successfully generated. Over-expression of ZBTB20 mediated by the recombinant was detected hoth in vitro and in vivo, with lhe aclivity of inhihiting the transcription of its target gene alpha-fetoprolein. CONCLUSION: Recombinant adenovirus Ad-ZBTB20 over-expresses ZBTB20 protein with the transcription regulation acctivity, which is a useful tool lot investigating the biological role of ZBTB20.

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期刊信息
  • 《第二军医大学学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:第二军医大学
  • 主办单位:第二军医大学
  • 主编:吴孟超
  • 地址:上海市翔殷路800号
  • 邮编:200433
  • 邮箱:bxue@smmu.edu.cn
  • 电话:021-81870791
  • 国际标准刊号:ISSN:0258-879X
  • 国内统一刊号:ISSN:31-1001/R
  • 邮发代号:4-373
  • 获奖情况:
  • 2008年被评为首批"中国精品科技期刊"2008年获第二...,2004年获第四届全军医学期刊质量评比优秀奖,2002年获第二届国家期刊奖百种重点期刊奖,2000年获首届《CAJ-CD规范》执行评优活动执行优秀奖,1999年获上海高校优秀自然科学学报评比一等奖,1999年获全国高校自然科学学报及教育部优秀科技期...,1997年获上海科技期刊评比二等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,荷兰文摘与引文数据库,荷兰医学文摘,美国剑桥科学文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:30859