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靶向性DNA甲基化酶在pET32a原核表达载体中的表达和鉴定
  • ISSN号:1673-6273
  • 期刊名称:《现代生物医学进展》
  • 分类:Q78[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西西安710032, [2]第四军医大学预防医学系流行病学教研室,陕西西安710032
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(30670453)
中文摘要:

目的:在pET32a原核表达载体中表达融合myc-6his标签的靶向性甲基化酶B1-3a并进行鉴定。方法:以含有B1.3a基因的pcDNA4.0-B1-3a-myc-6his质粒为模板,通过PCR的方法扩增获得融合有myc-6his标签序列的目的区段B1-3a,然后克隆入表达载体pET32a;以SDS-PAGE和Westernblot方法对表达产物进行鉴定。结果:表达产物中在分子量43kD左右可见与目的蛋白分子量相符的条带,该条带可被6his标签单克隆抗体特异识别。结论:正确构建了靶向性甲基化酶B1-3a的原核表达载体,靶向性甲基化酶能够在pET32a中成功表达.

英文摘要:

Objective: To clone and express the targeting methyltranferase B 1-3a gene fused with myc-6his tag in prokaryotic expression system and to identify the protein of fused expression. Methods: The B1-3a gene was amplified from pcDNA4.0- B1-3a- his-6myc plasmid with PCR method and cloned into the expression vector pET32a. The expression product was analyzed with SDS-PAGE and Western blot. Results: A positive protein band with molecular weight about 43 kD was found in the expression product, which is accordant with interest protein, and this band could be specifically recognized by anti-6his monoclonal antibody. Conclusion: The targeting DNA methyltransferase B1-3a was cloned into the expression vector correctly and expressed successfully in prokaryotic expression system.

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期刊信息
  • 《现代生物医学进展》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:黑龙江省卫生厅
  • 主办单位:黑龙江省红十字医院 黑黑龙江省红十字医院 黑龙江省森林工总医院
  • 主编:申宝忠
  • 地址:哈尔滨市南岗区花园街184号403
  • 邮编:150001
  • 邮箱:biomed_54@126.com
  • 电话:0451-82583800 53658268
  • 国际标准刊号:ISSN:1673-6273
  • 国内统一刊号:ISSN:23-1544/R
  • 邮发代号:14-12
  • 获奖情况:
  • 国内外数据库收录:
  • 被引量:33230