中文摘要：

本研究探索建立用于特异性基因沉默的靶向性DNA甲基化技术。分别构建了以GAL4 DNA结合结构域导向的以及合成串联锌指蛋白导向的靶向性DNA甲基化酶，并构建了含有对应靶序列的病毒基因和癌基因启动子控制的报告基因。1）体外靶向性实验实验重组表达了锌指蛋白靶向性甲基化酶，未能成功的到可容的有功能蛋白。2）细胞内游离DNA水平，通过瞬时共转染、报告基因分析和甲基化测学，无论是GAL4还是锌指蛋白靶向的甲基化酶都能有效地向靶基因序列引入甲基化，并导致基因沉默。3）将靶报告基因稳定整合入细胞染色体，将靶向甲基化没导入细胞，分析在染色这水平对靶基因序列的甲基化和基因沉默。GAL4 DNA结合蛋白导向的甲基化酶可以引起对靶基因的抑制，但是未能检测到甲基化；我们拟进一步尝试结合促进DNA甲基化的因子提高靶向性甲基化的效率。4）研究新基因SAW1参与靶向性DNA损伤修复的机制，并获得重要发现Saw1是一个新的结构特异性DNA结合蛋白，通过其C端结构域对DNA双链断裂修复中间产物结构的识别和N端与Rad1/10核酸酶复合体的相互作用，在DNA修复的特定阶段将核酸酶复合体靶向到修复中间体执行修复。