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杉木SRAP-PCR体系优化
  • ISSN号:1000-2006
  • 期刊名称:《南京林业大学学报:自然科学版》
  • 时间:0
  • 分类:S722[农业科学—林木遗传育种;农业科学—林学] Q81[生物学—生物工程]
  • 作者机构:[1]南京林业大学,林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室,江苏南京210037, [2]福建省林业科学研究院,福建福州350012
  • 相关基金:国家林业公益性行业科研专项项目(201004049);国家自然科学基金重点项目(30930077);江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)
中文摘要:

为建立杉木SRAP-PCR反应体系,利用L15(4^5)正交设计对影响杉木SRAP-PCR反应体系的Mg^2+、dNTPs、引物、Taq酶和DNA浓度5种因素的4个水平进行优化实验,结合正交直观分析和方差分析,对影响反应较大的Mg舢、dNTPs和引物浓度进行单因素实验,最终确定杉木SRAP-PCR最佳的反应体系为:在20μL的PCR反应体系中,Mg^2+’浓度为2.25mmol/L、dNTPs为0.15mmol/L、引物浓度为0.4Ixmol/L、Taq酶为1.5txmol/min、模板DNA为60ng,10xPCRBuffer2IxL,不足部分用双蒸水补充至20μL。PCR反应程序的两步最适退火温度第1步为35℃,第2步为53℃。利用上述反应体系进行杉木PCR扩增,能得到清晰、稳定的条带。

英文摘要:

In order to optimize SRAP-PCR reaction system for Chinese fir,the orthogonal design L16(4^5) was considered with different concentrations of Mg^2+, dNTPs, primer, Taq DNA polymerase and DNA template in SRAP-PCR reaction system for Chinese fir. The results of PCR were evaluated by visual and variance analysis ,then the concentrations of Mg^2+, dNTPs,primer were rectified with single-factor design. Finally, the results showed that the best reaction system was the combination in 20 μL reaction solution, containing of Mg^2+ 2.25 mmol/L, dNTPs 0.15 mmol/L, primer 0.4 μmol/L, Taq DNA polymerasel.5 p.mol/min and DNA template 60 ng,2 μL10xPCR Buffer and ddH20 to 20 μL. The fimt optimal an- healing temperature was 35 ℃ ,and the second step was 53 ℃. The optimized reaction system of Chinese fir described a- bove can get clear and stable bands.

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期刊信息
  • 《南京林业大学学报:自然科学版》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:江苏省教育厅
  • 主办单位:南京林业大学
  • 主编:曹福亮
  • 地址:南京市龙蟠路159号南京林业大学学报编辑部
  • 邮编:210037
  • 邮箱:xuebao@njfu.edu.cn
  • 电话:025-85428247 85427076
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-2006
  • 国内统一刊号:ISSN:32-1161/S
  • 邮发代号:28-16
  • 获奖情况:
  • 全国高校优秀学术期刊一等奖、江苏省自然科学学报...
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,英国科学文摘数据库,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:21690