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鹅源坦布苏病毒 RT-LAMP快速检测方法的建立
  • ISSN号:1004-1524
  • 期刊名称:《浙江农业学报》
  • 时间:0
  • 分类:S851.347.2[农业科学—预防兽医学;农业科学—兽医学;农业科学—畜牧兽医]
  • 作者机构:[1]江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014
  • 相关基金:国家自然科学基金项目(31172345); 江苏省农业科技自主创新资金项目[cx(12)5048]
中文摘要:

坦布苏病毒是新发现的一种可引起家禽产蛋和采食量下降及死亡的黄病毒属病毒。根据GenBank中登录的鹅源坦布苏病毒NS5基因序列,利用Primer Explorer V 4软件在序列保守区域设计1套特异识别NS5基因序列中6个不同区段的环介导等温扩增( loop-mediated isothermal amplification , LAMP)引物,并以此套引物建立一种基于LAMP技术的鹅源坦布苏病毒检测方法。结果表明,该方法灵敏度极高,是普通PCR方法的100倍,只能特异性扩增坦布苏病毒的RNA,对于其他常见禽RNA病毒均无特异性扩增。在反应体系中加入SYBR Green Ⅰ染料后,通过肉眼观察有无绿色荧光可直接判定结果。该方法特异性强,灵敏度高,无需特殊仪器,简便,快速,适用于鹅源坦布苏病毒的临床快速检测。

英文摘要:

In this study , a RT-LAMP ( reverse transcription loop-mediated isothermal amplification ) assay was de-veloped to rapidly detect and diagnose goose tembusu virus (GTMUV).Using Primer Explorer V4 software, a series of specific primers were designed based on the nucleotide sequences of GTMUV NS5 gene available in GenBank . These primers targeted 6 distinct conserved sequences according to the conserved region of NS5 gene.The results showed the RT-LAMP method specifically amplified GTMUV but not other common avian disease RNA viruses , and the optimum reaction temperature and time were verified to be 60℃and 60 min.Compared with other methods , this method was 100 times more sensitive than the conventional PCR .Meanwhile , it did not require complicated thermal cycling steps and denaturation , with the addition of SYBR GreenⅠdye in the reaction mixture , and the results could be differentiated by naked eyes .Thus, the results proved that RT-LAMP was a reliable, accurate, simple and practi-cal method for the detection of avian Tembusu virus in the field .

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期刊信息
  • 《浙江农业学报》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:浙江省农业科学院
  • 主办单位:浙江省农业科学院 浙江省农学会
  • 主编:陈剑平
  • 地址:杭州市石桥路198号浙江省农业科学农村发展与信息研究所
  • 邮编:310021
  • 邮箱:zjnyxb@126.com
  • 电话:0571-86404190
  • 国际标准刊号:ISSN:1004-1524
  • 国内统一刊号:ISSN:33-1151/S
  • 邮发代号:
  • 获奖情况:
  • 2000年浙江省自然科学期刊协会三等奖,浙江省2009-2010年度优秀科技期刊奖
  • 国内外数据库收录:
  • 英国农业与生物科学研究中心文摘,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:14095