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免疫亲和色谱特异性剔除中药方剂四逆散中的柚皮苷
  • ISSN号:1000-8713
  • 期刊名称:《色谱》
  • 时间:0
  • 分类:O658[理学—分析化学;理学—化学]
  • 作者机构:[1]南京大学生命科学学院医药生物技术国家重点实验室,江苏南京210093
  • 相关基金:国家自然科学基金重大研究计划资助项目(No.90209040).
中文摘要:

为了获得剔除柚皮苷(naringin)的中药方剂四逆散样品以供其药理活性探讨时使用,制备了抗柚皮苷抗体的免疫亲和色谱柱,用于特异性地剔除四逆散中的柚皮苷。首先合成了柚皮苷的完全抗原——柚皮苷与牛血清白蛋白的结合物naringin—BSA,并用naringin—BSA对新西兰兔进行免疫获得抗血清,再将其纯化后与经CNBr活化的Sepharose 4B凝胶共价偶联制成免疫亲和色谱柱。将四逆散提取物样品溶液上样该色谱柱,洗脱,制得特异性剔除了柚皮苷的四逆散样品。由检测结果可知,naringin—BSA被成功合成。将其用于免疫新西兰兔,获得的抗血清的效价经酶联免疫吸附法(ELISA)测定达到1:30000,抗体IgG的纯度达94%,交叉反应率低。在IgG与Sepha—rose4B合成的IgG—Sepharose免疫亲和色谱柱中,IgG的偶联率为87%。用该免疫亲和色谱柱处理四逆散后,其中所含的柚皮苷几乎完全被剔除。结果证明,利用抗柚皮苷免疫亲和色谱,能特异性地剔除四逆散或其他样品中的柚皮苷成分。

英文摘要:

To specifically deplete the compound naringin from Si-Ni-San, a traditional Chinese prescription, an immunoaffinity chromatography column was prepared. The naringin bovine serum albumin (BSA) complex (naringin-BSA) was synthesized to make the complete antigen naringin-BSA. Polyclonal antibody was prepared from the serum of rabbit immunized with naringin-BSA. Then, an immunoaffinity column was made by covalently coupling the polyclonal antibody to CNBr-activated Sepharose 4B and used for depleting naringin from Si-Ni-San. The polyclonal antibody obtained from the rabbit serum was found through enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) to show the titer of 1 : 30 000, the purity of 94% and low cross-reaction rate. The coupling rate of the polyclonal antibody to Sepharose 4B was 87%. By using this column, naringin in Si-Ni-San was selectively depleted from the whole extract. This immunoaffinity column of anti-naringin antibody could be used for specifically depleting naringin from Si- Ni-San and other samples.

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期刊信息
  • 《色谱》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国化学会 中国科学院大连化学物理研究所
  • 主编:张玉奎
  • 地址:大连市中山路457号
  • 邮编:116023
  • 邮箱:sepu@dicp.ac.cn
  • 电话:0411-84379021
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-8713
  • 国内统一刊号:ISSN:21-1185/O6
  • 邮发代号:8-43
  • 获奖情况:
  • 1998年获中国科学院科学出版基金择优支持(1998-2...,2001年获第四届中国科学院优秀期刊二等奖,2002年获第三届中国科协优秀期刊三等奖,连续多年被评为辽宁省一级期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),波兰哥白尼索引,荷兰文摘与引文数据库,美国生物医学检索系统,美国剑桥科学文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),英国英国皇家化学学会文摘,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:26730