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目的：采用高效液相色谱联用三重四级杆质谱（HPLC-MS／MS）测定芍药甘草汤中芍药苷、甘草酸及甘草次酸三种成分的含量。方法：色谱柱采用Eclipse PlusC18（2．1mm×50mm，1．8mm）；流动相为0．1％甲酸乙腈和0．1％甲酸水溶液，流速设定为0．3mL·min^-1，柱温为35℃，进行梯度洗脱。根据待检测化合物的性质，优化相关定量分析的质谱参数，多重反应监测（MRM），进行数据的采集。结果：芍药甘草汤中芍药苷、甘草酸及甘草次酸的含量分别为：160．46±3．82mg·ml^-1，115．66±3．13mg·ml^-1，8．34±0．34mg·ml^-1。结论：本实验精密性良好，重现性高，分析方法准确，定量数据可靠。