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基于适配体亲和毛细管电泳-激光诱导荧光检测的凝血酶分析
  • ISSN号:1000-8713
  • 期刊名称:色谱
  • 时间:0
  • 页码:35-41
  • 语言:中文
  • 分类:O658[理学—分析化学;理学—化学]
  • 作者机构:[1]山东师范大学生命科学学院,山东济南250014, [2]中国科学院生态环境研究中心环境化学与生态毒理学国家重点实验室,北京100085
  • 相关基金:国家自然科学基金项目(No.20707034)、中国科学院知识创新工程青年人才领域前沿项目(RCEES-QN-200715)和中国科学院生态环境研究中心青年人才专项基金项目.
  • 相关项目:DNA加合物检测新方法及其作为环境致癌物生物标记物的应用
中文摘要:

以一种高亲和力适配体作为亲和荧光探针,以自建的毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)检测装置为基础,建立了一种高灵敏、快速测定人凝血酶的方法。荧光标记的凝血酶适配体特异性地与凝血酶结合并形成稳定的凝血酶-适配体复合物,采用CE-LIF对复合物进行分离检测,从而测定凝血酶浓度。探讨了盐离子种类及浓度对适配体与凝血酶结合的影响,并在选定的电泳条件下对凝血酶检测的线性范围、检出限和重现性进行了测定。结果表明,盐离子存在的条件下适配体与凝血酶的亲和力降低,不利于两者的结合;人血清溶液中,凝血酶浓度在0.25~10nmol/L范围内与复合物峰面积具有良好的线性相关性(r^2=0.991),检出限(S/N=3)为55.6pmol/L;精密度和回收率测定结果均能满足分析的要求。

英文摘要:

The method for the determination of human thrombin by an aptamer was developed based on capillary electrophoresis (CE) with laser induced fluorescence (LIF) detection. The concentration of thrombin was calculated through the peak area of the thrombin-aptamer complex, which was separated and detected by CE-LIF. Because of the binding favorable G-quartet conformation potentially involved in the specific aptamer, it was assumed that monovalent and bivalent cations promoting the formation of a stable G quadruplex conformation in the aptamer may enhance the binding of the aptamer and thrombin. Therefore, the effects of various metal cations on the binding of human thrombin and the aptamer were investigated. The results showed that the cations like K^+ and Mg^2+ could not stabilize the affinity complex. The linear range, detection limit and reproducibility were measured. The linear range was 0.25-10 nmol/L (r^2=0.991), and the detection limit of thrombin was 55.6 pmol/L. Regarding the advantages of high efficiency and rapid separation, low sample consumption, and high sensitivity, CE-LIF is a potential and powerful alternative to conventional immunoaffinity assays in clinical diagnostics.

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期刊信息
  • 《色谱》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国化学会 中国科学院大连化学物理研究所
  • 主编:张玉奎
  • 地址:大连市中山路457号
  • 邮编:116023
  • 邮箱:sepu@dicp.ac.cn
  • 电话:0411-84379021
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-8713
  • 国内统一刊号:ISSN:21-1185/O6
  • 邮发代号:8-43
  • 获奖情况:
  • 1998年获中国科学院科学出版基金择优支持(1998-2...,2001年获第四届中国科学院优秀期刊二等奖,2002年获第三届中国科协优秀期刊三等奖,连续多年被评为辽宁省一级期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),波兰哥白尼索引,荷兰文摘与引文数据库,美国生物医学检索系统,美国剑桥科学文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),英国英国皇家化学学会文摘,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:26730