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栎属植物流式细胞术实验体系的建立与优化
  • ISSN号:1000-2006
  • 期刊名称:《南京林业大学学报:自然科学版》
  • 时间:0
  • 分类:S792.18[农业科学—林木遗传育种;农业科学—林学]
  • 作者机构:[1]南京林业大学生物与环境学院,江苏南京210037
  • 相关基金:国家自然科学基金项目(31370666); 江苏高校协同创新计划; 江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)
中文摘要:

为建立适于栎属植物的流式细胞核实验体系,分别利用Tris-MgCl2、Galbraith's、Marie's和Otto's细胞核分离缓冲液对麻栎、栓皮栎、白栎和短柄枹栎制备细胞核悬浮液。检验发现:Tris-MgCl2、Galbraith's缓冲液所制备样品未能检测出DNA峰,Otto's缓冲液制备的样品中,除白栎外其他3个样品的测试结果均较差,Marie's缓冲液所制备的4个样品测试DNA峰的变异系数(CV)均大于10%。采用正交设计方法对经典Marie's缓冲液中的β-巯基乙醇和Tween 20组分进行了优化,发现麻栎、栓皮栎、白栎和短柄枹栎的最适β-巯基乙醇浓度和Tween 20体积比分别为45 mmol/L和2.5%、15 mmol/L和2.0%、60 mmol/L和1.0%及30 mmol/L和1.0%。运用改进后的最适Marie's缓冲液进行流式细胞核测定,4种样品的变异系数均显著下降(在3.52%-4.81%之间),表明改进后的Marie's缓冲液对4种栎属植物的测试结果准确可信。

英文摘要:

In this research, in order to establish a FCM system in Quercus, four common nuclear isolation buffers ( Tris- MgCI2, Galbraith's, Marie's and Otto's) were used to prepare samples from mature leaf tissues of four wild oaks ( Quercus acutissim, Q. variabilis, Q. fabri, Q. glandulifera var. brevipetiolata). Then all samples were tested on flow cytometer. No DNA peak was detected in the samples treated with Tris-MgC12 and Galbraith's buffers. Samples prepared with Otto's buffer, except for Q. fabri, showed poor results. The coefficients of variation (CV) of the DNA peak of the 4 samples prepared with Marie's buffer were larger than 10%. An orthogonal design was used to optimize conventional Marie's buffer in two factors: β-mercaptoethanol and Tween 20. Results indicated that the most suitable concentration of β-mercaptoethanol and Tween 20 on Quercus acutissim, Q. variabilis, Q. fabri, Q. glandulifera var. brevipetiolata respectively was 45 mmol/L,2.5%; 15 retool/L, 2.0%; 60 mmol/L, 1.0%; 30 mmol/L, 1.0%. CVs for Quercus DNA peak found had decreased obviously to 3.52%-4.81% by applying modified Marie's buffers. It proved that the test results of the four Quercus samples prepared with modified Marie's buffers were accurate and dependable. This research laid a foundation for a wide range of studies 6n field population of Quercus by FCM.

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期刊信息
  • 《南京林业大学学报:自然科学版》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:江苏省教育厅
  • 主办单位:南京林业大学
  • 主编:曹福亮
  • 地址:南京市龙蟠路159号南京林业大学学报编辑部
  • 邮编:210037
  • 邮箱:xuebao@njfu.edu.cn
  • 电话:025-85428247 85427076
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-2006
  • 国内统一刊号:ISSN:32-1161/S
  • 邮发代号:28-16
  • 获奖情况:
  • 全国高校优秀学术期刊一等奖、江苏省自然科学学报...
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,英国科学文摘数据库,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:21690