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Tet调控STGC3基因表达CNE2细胞系的建立及其功能初步研究
  • ISSN号:1000-3282
  • 期刊名称:《生物化学与生物物理进展》
  • 时间:0
  • 分类:R73-3[医药卫生—肿瘤;医药卫生—临床医学]
  • 作者机构:[1]南华大学肿瘤研究所,衡阳421001
  • 相关基金:国家自然科学基金(30470967),湖南省自然科学基金(03Jjy3029),中国博士后科学基金(2004035652)资助项目.
中文摘要:

利用Tet-on调控系统,建立受强力霉素诱导STGC3基因表达的CNE2细胞系,为进一步研究STGC3的功能提供了一个理想的实验平台.先后将调控质粒pTet-on和反应质粒pTRE-STGC3转染入CNE2细胞,并用G418和潮霉素分别进行两轮筛选,运用RT-PCR选择对强力霉素诱导敏感的细胞克隆.用不同浓度强力霉素诱导CNE2/Tet/pTRE-STGC3细胞,RT-PCR检测STGC3的表达,确定强力霉素的最佳诱导浓度.采用此浓度的强力霉素分别诱导CNE2、CNE2/Tet/pTRE、CNE2/Tet/pTRE-STGC3三组细胞,测定细胞的生长曲线、克隆形成率和细胞周期分布.诱导STGC3基因高表达,CNE2细胞增殖速度显著减慢(P〈0.05),克隆形成能力显著降低(P〈0.01);流式细胞仪检测结果显示,瘤细胞群体中处于G0/G1期细胞数增加,细胞阻滞于G0/G1期.Tet调控STGC3基因表达CNE2细胞系的成功建立,为进一步研究STGC3基因的功能提供一个理想的细胞模型.

英文摘要:

In an attampt to establish the functional expression of STGC3 with doxycycline (Dox) induced Tet-on regulating system in human nasopharyngeal carcinoma cell line CNE2, an ideal experimental platform was provided for further studies of STGC3. pTet-on regulating plasmid was transfected into CNE2, and stable expression of Tet-on was established in CNE2 through G418 select. Then the response plasmid of recombinant pTRE-STGC3 was steadily transfected into positive CNE2/Tet-on cells with hygromycin screen. Dox was used to induce the expression of STGC3 and a cell clone sensitive to Dox was selected. The best-induced concentration was determined with different concentration of Dox induction. Growth curves, clone formation rate and cell cycle distribution were detected after STGC3 gene up-regulated expression with Dox induction. The growth capacity and clone formation potential of CNE2/Tet/pTRE-STGC3 was significantly suppressed, compared with the controls (P〈0.05). FCM analysis indicated that G0/G1 phrase cell rate of CNE2/Tet/pTRE-STGC3 was markedly higher than that of the controls and CNE2/Tet/pTRE-STGC3 cells were arrested in G0/G1 phase of cell cycle. Functional expression of STGC3 under Dox induced Tet-on regulation system was successfully established in CNE2, which provided an ideal experimental platform for further functional study of STGC3.

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期刊信息
  • 《生物化学与生物物理进展》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国科学院生物物理研究所 中国生物物理学会
  • 主编:王大成
  • 地址:北京市朝阳区大屯路15号
  • 邮编:100101
  • 邮箱:prog@sun5.ibp.ac.cn
  • 电话:010-64888459
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-3282
  • 国内统一刊号:ISSN:11-2161/Q
  • 邮发代号:2-816
  • 获奖情况:
  • 1999年中国期刊奖提名奖,2000年中国科学院优秀期刊特别奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),荷兰文摘与引文数据库,美国剑桥科学文摘,美国科学引文索引(扩展库),美国生物科学数据库,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:18821