中文摘要：

[目的]构建一个适于嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)的基因打靶载体,并分析转化四膜虫的特性.[方法]以嗜热四膜虫组蛋白H4-I基因作为启动子,利用H4-I基因的5′和3′侧翼区作为同源臂,并且保留H4-I基因编码区的起始密码子ATG和终止密码子TGA,中间嵌入巴龙霉素抗性标记基因neo,从而构建一个基因打靶载体.将该载体电击转化到嗜热四膜虫接合株体内,使其同源重组到四膜虫H4-I基因上.通过巴龙霉素抗性筛选、PCR扩增目的基因对抗性虫株进行鉴定.光学和电子显微镜观察抗性虫株形态变化.[结果]成功构建了一个适于嗜热四膜虫的基因打靶载体,将其电击转化到四膜虫体内,抗性虫株的生长速度明显高于普通四膜虫,显微镜观察抗性虫株形态变小,大约是正常形态的1/20～1/30,抗性虫株表面光滑,未见纤毛.[结论]利用基因打靶载体将neo基因定向整合到四膜虫H4-Ⅰ基因内部,为今后在嗜热四膜虫体内表达外源蛋白奠定了基础.