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葡萄球菌肠毒素C基因的克隆表达及其生物学活性鉴定
  • 期刊名称:中国预防兽医学报,2009(8):-600-604
  • 时间:0
  • 分类:S852.61[农业科学—基础兽医学;农业科学—兽医学;农业科学—畜牧兽医]
  • 作者机构:[1]东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030, [2]大连民族学院生命科学学院,辽宁大连116600, [3]吉林农业大学动物科技学院,吉林长春130118, [4]大连翔大生物技术有限公司,辽宁大连116620, [5]中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241
  • 相关基金:国家自然科学基金(30671554)
  • 相关项目:葡萄球菌超抗原SEC无毒变异体的分子免疫防御机制研究
中文摘要:

为表达和纯化金黄色葡萄球菌(金葡菌)超抗原毒素,本研究从金葡茵中克隆葡萄球菌肠毒素C2(sec2)基因,构建了表达葡萄球菌肠毒素C与谷胱甘肽硫转移酶(GST-SEC)融合蛋白的重组质粒(pGEMSEC),通过大肠杆菌表达、亲和纯化、酶切、再亲和纯化,建立了便于大量制备高纯度的重组SEC(rSEC)的简便方法。此外,通过酶联免疫试验及双向琼脂扩散试验检测了rSEC免疫反应性,并通过测定rSEC刺激鼠脾细胞产炎性因子来检测了rSEC的超抗原活性。结果表明,rSEC与野生型SEC具有相同的免疫反应性和超抗原活性,为在今后对该超抗原进行进一步应用性开发和构建定点减毒诱变奠定了工作基础。

英文摘要:

In this study we cloned staphylococcal enterotoxin C2 gene (sec2) from Staphylococcus aureus and constructed a bacteria strain that expresses staphylococcal enterotoxin C and Glutathione S-transferase fusion protein. The recombinant SEC was purified and its immunoreactivity was confirmed by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and double agar diffusion test. The superantigenic activity was analyzed by detecting the production of inflammatory cytokines in mouse spleen cell culture stimulated by rSEC. The results indicated that rSEC has similar biological activity with wild SEC (wSEC).

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