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渗透剂对苹果酸脱氢酶包含体的复性作用
  • ISSN号:0438-1157
  • 期刊名称:《化工学报》
  • 时间:0
  • 分类:O629.73[理学—有机化学;理学—化学] O643.1[理学—物理化学;理学—化学]
  • 作者机构:[1]天津大学化工学院,天津300072
  • 相关基金:国家自然科学基金项目(20476081,20676098).
中文摘要:

将甜菜碱和海藻糖两种渗透剂作为添加剂,考察了其促进苹果酸脱氢酶包含体的复性作用。结果显示,甜菜碱和海藻糖均可有效促进大肠杆菌苹果酸脱氢酶包含体的复性。在本文实验条件下,随添加甜菜碱浓度的升高,复性后苹果酸脱氢酶的比活增大;而海藻糖则出现最佳添加浓度使复性后苹果酸脱氢酶的比活最大;同时在盐酸胍浓度较高、不添加渗透剂时复性效果较差的复性体系中,若添加合适浓度的甜菜碱或海藻糖即可有效促进苹果酸脱氢酶的复性,显示出渗透剂作为添加剂在实际包含体蛋白质复性过程中的应用前景。另外,通过外源荧光分析发现,添加甜菜碱和海藻糖均可降低苹果酸脱氢酶表面疏水性区域的暴露程度;圆二色光谱分析则表明,甜菜碱和海藻糖可以促进苹果酸脱氢酶α-螺旋结构的生成。

英文摘要:

Recombinant E. coli malate dehydrogenase (eMDH) was expressed as inclusion bodies (IBs), and the eMDH IBs was used as a real oligomeric protein to study protein refolding from IBs assisted by two major osmolytes, betaine and trehalose. It was observed that the specific activity of eMDH was enhanced by increasing betaine concentration, while there was an optimal trehalose concentration at which the protein was favorably renatured. Furthermore, the renaturation could be improved even at high guanidinium chloride concentrations (up to 0. 4 mol · L^-1) in the presence of betaine or trehalose, It was shown by binding of 1-anilino-8-napthalene sulfonic acid (ANS) to eMDH as a function of osmolyte concentration at different guanidinium chloride concentrations that the hydrophobic residue exposure on eMDH surface was reduced in the presence of osmolyte. Circular dichroism (CD) spectra indicated that osmolyte could promote the formation of a-helical in eMDH.

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期刊信息
  • 《化工学报》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国化工学会 化学工业出版社
  • 主编:李静海
  • 地址:北京市东城区青年湖南街13号
  • 邮编:100011
  • 邮箱:hgxb126@126.com
  • 电话:010-64519485
  • 国际标准刊号:ISSN:0438-1157
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1946/TQ
  • 邮发代号:2-370
  • 获奖情况:
  • 中国科协优秀期刊二等奖,化工部科技进步二等奖,北京全优期刊奖,中国期刊方阵“双效”期刊,第三届中国出版政府奖
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),荷兰文摘与引文数据库,美国工程索引,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:35185