蛋白质分离复性研究对其生产技术的革新具有重要意义。本项目针对基因重组蛋白质分离复性中存在的问题,研究和构建新型金属螯合亲和反胶团系统,实现蛋白质的高选择性分离和复性。首先利用两种亲水亲油平衡值相差较大的非离子型表面活性剂,构建了新型反胶团系统。在此基础上,将过渡金属离子螯合剂磷酸二异辛酯引入反胶团系统,构建成功全新的金属螯合亲和反胶团,系统研究了亲和反胶团的热力学性质和蛋白质萃取行为。该亲和反胶团系统含水率高,相分离容易;蛋白质萃取容量较高,反萃容易,活性和结构保持完整;表现了高选择性金属螯合亲和萃取特性,不仅可用于蛋白质混合物的分离,而且成功实现了从基因重组大肠杆菌破碎液中高选择性萃取融合聚组氨酸的增强型绿色荧光蛋白(6xHis-EGFP),收率和纯度均达到85%以上。在此基础上,利用该亲和反胶团萃取复性以包涵体形式表达的6xHis-EGFP。结果表明,反胶团内溶解的EGFP可完全复性,复性产物回收条件与天然EGFP相同。进一步优化复性操作条件,可提高变性蛋白质萃取容量,提高系统的蛋白质复性能力。研究成果已发表学术论文11篇,其中SCI收录7 篇;EI收录7篇。
英文主题词nonionic surfactant;reverse micelle;metal-chelate binding;affinity extraction; protein refolding