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GILZ真核表达载体的构建及其表达定位

ISSN号：1000-4718
期刊名称：《中国病理生理杂志》
时间：0
分类：R318.15[医药卫生—生物医学工程;医药卫生—基础医学]
作者机构：[1]南方医科大学珠江医院内分泌科,广东广州510282, [2]暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心,广东广州510632, [3]南方医科大学病理生理教研室,广东广州510515, [4]广州市中医院内分泌科,广东广州510130
相关基金：国家自然科学基金资助项目（No.30470829）

作者：王毅飞[1], 邢飞跃[2], 蔡德鸿[1], 陈宏[1], 莫永炎[3], 伊娜[4]

关键词：糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白, C3H10T1/2细胞, 真核表达载体, Glucocorticoid induced leucine zipper, C3H10T1/2 cells, Eukaryotic expression vector

中文摘要：

目的：克隆、构建HA标签的糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白GILZ表达载体，观察其在细胞中表达与定位，为研究GILZ在脂肪细胞分化中的作用提供工具。方法：采用逆转录PCR（RT—PCR）法从C3H10T1／2细胞中扩增带有HA标签的GILZcDNA编码区，并将其重组于真核表达载体pcDNA3中。经酶切、序列鉴定分析后，将该重组质粒通过Lipofectamine2000脂质体和CaCl2方法，分别转染C3H10T1／2和293T细胞，用HA抗体免疫荧光和免疫印迹法检测GILZ在细胞内的表达、分布及分子量大小。结果：HA—GILZ表达载体经酶切鉴定和测序分析确认构建成功，并在C3H10T1／2和293T细胞中获得了高效表达。在荧光显微镜下，GILZ主要表达于细胞质内，分子量约20kD。结论：成功构建HA—GILZ基因表达载体并表达于C3H10T1／2细胞质中，为GILZ的功能研究奠定了基础。

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