采用高通量的长片段基因表达系列分析技术构建了平菇生活史中两个重要的分化发育阶段,菌丝体和子实体原基的基因表达频谱,分别获得10103菌丝体阶段表达的基因标签,10176个子实体原基阶段表达的基因标签,其中仅在菌丝体中表达的基因标签有327个,仅在子实体原基中表达的基因标签有482个,在两种发育阶段都表达的基因标签有2544个。通过同EST数据库比对,少数标签可以比对到已知基因,大多数标签为未知的基因标签。采用cDNA末端快速扩增技术克隆了90个高、中、低度未知的差异表达基因标签,获得8个差异表达基因的cDNA全长。克隆了平菇甘油醛-3-磷酸脱氢酶编码区序列,获得了该基因的启动子区域,以含有内含子区域的甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因启动子作为顺式调控元件驱动目的基因的表达,选择潮霉素B磷酸转移酶基因和绿荧光蛋白基因的融合片段作为双报告基因表达盒,构建了Ti双元载体pPEH,实现了根癌农杆菌介导的平菇高效转化。构建了平菇差异表达基因PoHYD等部分基因的过表达与RNAi载体,比较了这些基因过表达与沉默转化子的基因表达水平、基因拷贝数、菌落形态、RAPD图谱,初步研究了部分差异表达基因的功能。
英文主题词Pleurotus ostreatus; LongSAGE;gene expression profile; differentially expressed gene; RNAi