无论是自然妊娠还是辅助生育,卵母细胞的成熟都是最为基础和极其关键的一步。而卵母细胞的生理活动,始终处于颗粒细胞的调控下有序地发育、成熟或凋亡。但卵母细胞与颗粒细胞的交流对话机制至今未得到完整的阐述。CFTR是一种Cl- 和HCO3- 的通道,属于ATP结合转运体超家族,是兼有通道和受体功能的一种调节蛋白,在细胞代谢、增殖、分化等基本功能活动中具有重要的功能。HCO3-通过CFTR进入胞内后作用于可溶性腺苷酸环化酶(sAC)上调胞内cAMP,使CREB磷酸化水平增加,并最终通过p-CREB调节相应基因的表达而影响细胞的发育。本课题前期工作已发现在颗粒细胞和卵母细胞胞膜上都有CFTR存在,是否提示这两种密切相连的细胞通过CFTR进行对话,并调节卵母细胞的发育和成熟?本课题拟通过细胞培养、蛋白分析、核酸测定、胞内pH测定等实验手段,探讨卵母细胞和颗粒细胞通过CFTR以HCO3进行交流对话的机制。
CFTR;HCO3-;adenylate cyclase;granulosa cell;oocyte maturation
囊性纤维化跨膜电导调节体(CFTR) 是一种Cl- 和HCO3- 的通道,属于ATP结合转运体超家族。其中,HCO3- 通过CFTR的转运出入细胞对细胞功能有着更为重要的作用,尤其对生殖有着重要的作用,由CFFR基因突变引起的囊性纤维化变性(CF)能够导致男性和女性生育能力下降,甚至不育。已有临床资料显示,CF女性存在不排卵和卵巢激素水平异常的现象,提示CFTR在排卵和激素分泌等卵巢功能中起到一定的作用。为探索CFTR在卵巢中的表达和作用,本研究用RT-PCR、Western blot和免疫荧光的方法检测了CFTR在颗粒细胞和卵母细胞中的表达;并用卵母细胞体外成熟的方法研究CFTR在卵母细胞成熟过程中的作用。研究结果显示,CFTR在性成熟的小鼠颗粒细胞和卵母细胞上都有表达,表达和动情周期无关。小鼠卵母细胞体外成熟实验的结果显示,CFTR抑制剂和腺苷酸环化酶抑制剂均能显著抑制第一极体的释放,降低卵母细胞成熟率(p