表达来源于盐藻的两个在转录水平上受高盐胁迫和磷饥饿诱导差异调节的钠磷共转运通道蛋白(DsSPT1,DsSPT2)的特异亲水片段(如跨膜区中间的及其C末端的亲水区段)作为抗原小肽制备特异性抗体,通过Western分析这两个膜蛋白的表达水平与上述胁迫(盐、无机磷胁迫及二者同时存在或动态变化等)的量化关系;利用红色荧光蛋白活体定位的方法对其在上述胁迫条件下通道蛋白的重新合成、运输及定位进行观察;同时利用胶体金免疫标记技术在电镜下对这两个膜蛋白不同亲水区段在在上述不同胁迫条件下在细胞膜上的精确定位进行研究。综合以上研究结果,可以对盐藻钠磷共转运通道这两个蛋白在盐藻响应上述胁迫过程中的差异表达及细胞学定位给出系统的阐述,为进一步的功能研究打下基础。
为了对盐藻DvSPT1及DvSPT2的合成、转运及细胞学定位进行研究,我们首先在大肠杆菌中表达、纯化了DvSPT1及DvSPT2特异性亲水肽段,并制备了特异性抗体。然后,通过Western分析了DvSPT1及DvSPT2在高盐及磷饥饿胁迫下蛋白量的变化,结果表明DvSPT1及DvSPT2在蛋白水平上受高盐及磷饥饿的诱导表达,但受诱导的强度较弱。我们还通过融合GFP的方法在异源体系-衣藻中对DvSPT1及DvSPT2的细胞学定位进行了研究,结果显示DvSPT1及DvSPT2定位于衣藻的叶绿体上。最后,我们利用特异性抗体,通过免疫荧光的方法,对DvSPT2在盐藻本身进行了细胞学定位,结果表明DvSPT2在盐藻自身中定位于质膜上。这些结果为揭示DvSPT1及DvSPT2在盐藻耐盐过程中的作用打下了基础。