中华蜜蜂为我国本土蜂种,嗅觉灵敏,具有抗螨特性。本项目将对中华蜜蜂参与嗅觉识别的感觉神经元膜蛋白(SNMP)进行分离和鉴定,对其在中蜂抗螨行为中的功能及细胞信号转导通路进行研究。研究主要内容(1)采用蛋白质双向电泳结合质谱鉴定方法分离并鉴定SNMP蛋白序列,明确蛋白种类及类型;(2)克隆中华蜜蜂SNMP相关基因全长,明确SNMP基因的组织表达特性;(3)构建SNMP原核及真核表达载体,制备SNMP单克隆抗体,并明确SNMP蛋白的组织定位;(4)采用RNA干扰技术研究SNMP基因功能,设置蜂螨接种鉴定实验,明确SNMP与中蜂抗螨的关系;(5)利用量子点标记技术监测目标蛋白单分子实时成象及表征变化,探讨其信号转导通路。本项目的实施将对今后进一步防治蜜蜂螨害、调控蜜蜂行为、保护珍贵遗传资源奠定基础,具有重要的理论和实践意义。
Apis cerana cerana;SNMP;mite resistance;RNA interference;signal transduct pathways
中华蜜蜂为我国本土蜂种,嗅觉灵敏,具有抗螨特性。本项目对中华蜜蜂触角组织中与嗅觉识别相关的感觉神经元膜蛋白(SNMP)基因进行了分离和鉴定,对其在中蜂抗螨行为中的细胞信号转导通路(Pathway)进行了研究。研究结果表明(1)采用蛋白质双向电泳结合生物质谱鉴定方法分离中华蜜蜂在抗螨过种中高丰度表达蛋白,明确了蛋白种类及类型,并对其中可能参与中华蜜蜂抗螨相关的蛋白进行了分类,发现SNMP 在中华蜜蜂抗螨过程中高丰度表达;(2)进一步克隆了中华蜜蜂SNMP基因全长,明确了中华蜜蜂SNMP 基因的组织表达特性;(3)对中华蜜蜂SNMP基因进行了系统进化分析;(4)构建了SNMP 原核表达载体,制备SNMP抗血清,并采用免疫组化方法研究了SNMP 蛋白在蜜蜂触角组织中的亚细胞定位;(5)采用RNA 干扰方法验证了中华蜜蜂SNMP 基因功能。本项目的研究结果将对今后进一步防治蜜蜂螨害、调控蜜蜂行为、保护珍贵遗传资源奠定基础。