构建绿色荧光蛋白与蚕豆萎蔫病毒2号(BBWV-2)运动蛋白的融合基因GFP:VP37,表达于BY-2悬浮细胞、原生质体、昆虫Tn细胞和本氏烟叶片,观察GFP:VP37在寄主细胞内的动态分布;用微管解聚剂Oryzalin和分泌途径抑制剂Brefeldin A处理细胞,结合微管、肌动蛋白微丝的荧光标记,探明运动蛋白从病毒复制中心寻靶到细胞周边定位于胞间连丝的运动过程,分析胞内运动与内质网和细胞骨架的关系。对野生型BBWV-2侵染细胞形成胞间运动管状结构进行电镜观察和免疫标记,揭示病毒的胞间运动模式,对病毒复制中心进行超微结构观察、蛋白免疫标记和核酸分子原位杂交,结合Brefeldin A和脂类合成抑制剂Cerulenin的处理,研究病毒复制中心的基本构架,了解寄主细胞代谢抑止对病毒复制的影响,探明复制及胞内运动过程中病毒与寄主因子的相互作用,为了解管状结构运动模式病毒与寄主的互作机制、探索病毒病防治新途径奠定基础。
英文主题词Broad bean wilt virus 2;movement protein;intracellular transport;targeting;host factor