中文摘要：

根据中国人HCV株序列设计引物，对HCV感染者血清进行长RT-PCR扩增，获得HCV NS3至NS5B长片断；通过序列分析，建立中国人HCV株共有序列；将该共有序列替代pNNeo/3-5B质粒的HCV序列，构建中国人HCV株选择性双顺反子亚基因组RNA复制子质粒；该质粒体外转录合成RNA，转染人肝癌细胞或其它细胞并进行G418筛选，对多个细胞集落的子代复制子序列分析，揭示适应性变异的特征及位点，将适应性变异引入亲代复制子，建立高水平复制的中国人HCV株RNA复制子模型。采用该模型，对多种单味或复方中药提取物进行抗HCV活性的高通量筛选，以期获得具有抗HCV活性的中药提取物。本研究为抗HCV药物的开发提供了一个新途径；并对中国人HCV株的体外复制机理及细胞致病机理的研究具有重要意义；同时，抗HCV活性中药提取物的高通量筛选，将为抗HCV活性先导化合物的研究奠定基础。

结论摘要：

本研究旨在建立HCV体外自主高效的HCV细胞模型，并应用于抗病毒药物的筛选。主要研究成果如下建立了系统完整的HCV标本库，共收集HCV阳性血清标本823份，对所有标本进行了HCV RNA定量检测，对大部分HCV RNA阳性标本进行了基因分型的检测，结果显示1b为中国人HCV的主要流行株,，同时存在2a，3a，3b，6a型的感染。标本库的建立不仅为本实验的研究提供了血清标本，也为其它HCV相关的基础及临床研究奠定了基础；建立了长链RT-PCR方法通过模板提取方法的筛选、引物的选择、逆转录酶即逆转录条件、DNA聚合酶即循环条件的优化，克服了HCV二级结构及ploy（u）结构对扩增的影响，建立了HCV5′端和3′端半基因组长链RT-PCR扩增方法；成功获得HCV5′端和3′端半基因组,并融合获得全长HCV基因组；以全长基因组质粒为模板扩增获得3′端6kb片断替代复制子质粒相应序列，构建了中国人亚基因组复制子质粒；体外转录获得HCV RNA片断，转染Huh-7细胞，G418筛选获得复制子克隆。亚基因组复制子的获得为下一步抗病毒药物的筛选奠定了基础，也为HCV体外复制机制的研究提供了模型