骨骼肌纤维类型受多种因子和信号通路的调节。研究发现NFATc1与Wnt/β-catenin信号通路均参与肌纤维类型的调控,并且NFATc1可能通过Wnt/β-catenin信号通路来发挥作用。本项目拟以猪骨骼肌卫星细胞为材料,通过高表达或干扰NFATc1及β-catenin分别研究其对肌纤维类型的影响;采用Western blotting、细胞免疫化学方法确定NFATc1对β-catenin表达、分布及转录活性的影响;利用荧光素酶报告基因和GST-pulldown等技术验证NFATc1与Wnt/β-catenin信号通路关键因子的相互作用。揭示NFATc1与 Wnt/β-catenin信号通路调控猪骨骼肌纤维类型决定的分子机理,为改善肉品质提供理论依据。
NFATc1;Wnt/β-catenin;skeletal muscle;fiber type;porcine
骨骼肌纤维类型受多种因子和信号通路的调节。研究发现NFATc1与Wnt/β-catenin信号通路均参与肌纤维类型的调控,并且NFATc1可能通过Wnt/β-catenin信号通路来发挥作用。本项目以猪骨骼肌卫星细胞为材料,通过高表达或干扰NFATc1及β-catenin分别研究其对骨骼肌卫星细胞及肌纤维类型的影响;采用Western blotting、细胞免疫化学方法确定NFATc1对β-catenin表达、分布及转录活性的影响。获得以下研究结果:证实了骨骼肌中,NFATc1的表达量与肌纤维类型有密切联系; 阻断CaN/NFAT信号通路抑制了猪骨骼肌卫星细胞的分化,降低MyHC I而提高MyHC IIb mRNA的表达水平; 成功构建NFATc1慢病毒干扰载体和腺病毒超表达载体; 干扰NFATc1,激活了Wnt/β-catenin通路,抑制慢肌分化; 超表达NFATc1抑制Wnt/β-catenin通路,提高MyHC1的表达而降低MyHC2B mRNA的表达; 激活Wnt/ β- catenin 信号通路促进骨骼肌卫星细胞成肌分化,并且诱导其向慢肌分化; EGCG 通过抑制Wnt / β -catenin 信号通路抑制猪骨骼肌卫星细胞的增殖,促进其分化;miR-199a-3p通过抑制AKT/mTOR信号通路抑制C2C12细胞分化。以上结果揭示NFATc1与Wnt/β-catenin信号通调控猪骨骼肌纤维类型决定的分子机理,为改善肉品质提供了理论依据。