中文摘要：

中性粒细胞是白细胞的重要组成部分，在机体抗感染防线中起重要作用。我们前期研究已知在菌血症中，低白细胞血症的形成与细菌增殖加速，白细胞破坏过多相关。在细菌导致低中性粒细胞血症的机制研究中，已知革兰染色阳性的金黄色葡萄球菌可以分泌杀中性粒细胞素，但革兰染色阴性细菌与中性粒细胞之间的作用机制尚无研究。结合本课题组前期工作，我们推测革兰染色阴性的细菌也可以释放抑制中性粒细胞功能的相关蛋白。本研究拟通过在相同基因背景下，对抗生素耐药程度不同的肺炎克雷伯菌菌血症动物模型，分析血液里中性粒细胞和细胞因子的变化、血液和组织中的菌落计数及组织的病理学改变，观察不同耐药类型的细菌对机体损害的差异性；收集细菌毒力最大的的实验组动物血浆，选取低中性粒细胞血症发生时相点的血浆，通过免疫蛋白质组学的检测，阐明由革兰染色阴性细菌释放的抑制中性粒细胞功能的蛋白及其作用机制，为临床治疗提供新思路和理论依据。

结论摘要：

机体在感染发生时，中性粒细胞的减少经常提示感染严重，患者预后较差。在细菌导致低中性粒细胞血症的机制研究中，已知革兰染色阳性的金黄色葡萄球菌可以分泌杀中性粒细胞素，但革兰染色阴性细菌与中性粒细胞之间的作用机制尚无研究。我们前期研究已知在菌血症中，低中性粒细胞血症的形成与细菌增殖加速，中性粒细胞破坏过多相关。本课题在前期研究基础之上，探索革兰染色阴性的细菌释放的抑制中性粒细胞功能的相关蛋白。本研究通过在相同基因背景下，制作不同耐药程度的三种肺炎克雷伯菌菌血症动物模型，分析血液里中性粒细胞的变化，血浆中TNFα、IL-17和HMGB1的变化，血液和组织中的菌落计数及组织中的病理改变。从固有免疫反应的改变，炎症因子的调节，菌落计数的多少，病理评分的变化揭示出对抗生素均敏感的细菌对机体的损害最大，而对抗生素均耐药的细菌对机体的损害最小。本研究继续收集细菌毒力最大的的实验组动物血浆，选取低中性粒细胞血症发生时相点的血浆，分析肺炎克雷伯菌菌血症时，机体血液里的中性粒细胞下降的机制。通过免疫蛋白质组学的检测，阐明由革兰染色阴性细菌释放的抑制中性粒细胞功能的蛋白为S-腺苷甲硫氨酸合成酶，丙酮酸脱氢酶，谷胱甘肽合成酶，UDP-半乳糖-4-异构酶，乙酸激酶A和延伸因子Tu（EF-TU），其中延伸因子Tu起重要的作用；并通过免疫共沉淀证实延长因子Tu通过外膜蛋白A发挥重要作用，为临床治疗提供新思路和理论依据。综上述本研究通过肺炎克雷伯菌血症的动物模型，发现相比于耐药菌组的实验动物，对抗生素敏均敏感细菌组的实验动物血液中的中性粒细胞和生存时间下降更明显，而血液中的炎症因子及组织的菌落计数和病理改变程度更显著，表明对抗生素均敏感的细菌对机体具有更大的威胁。本研究同时通过免疫蛋白质组学的研究发现肺炎克雷伯菌的延伸因子Tu在致低中性粒细胞血症中有重要作用，并主要通过外膜蛋白A发挥效果。