金属硫蛋白(Metallothionein, 简称MT)是一类与生物体解毒有关的金属结合蛋白,具有非常重要的生理及生物学功能。本研究利用蛋白质分离、纯化、测序和基因克隆等高级生物化学及分子生物学方法和技术手段,以河南华溪蟹(Sinopotamon yangtsekiense)为研究对象,对镉诱导下产生的MT进行分离、纯化、MTcDNA扩增及其基因克隆、MT基因亚型的比较、MT多态性及其生态服务功能
金属硫蛋白(Metallothionein,MT)是一类低分子量、富含半胱氨酸、能被金属诱导并结合多个金属原子的特殊非酶蛋白质,广泛存在于动物、植物及微生物中。蟹类是低等指示生物在水体环境代表性的物种。故本实验以河南华溪蟹(Sinopotamon henanens)为材料,从毒理学、生化及分子水平对MT进行了深入系统的研究。内容主要包括:(1)镉诱导华溪蟹不同组织(肝胰腺,鳃、肌肉、卵巢)MT的表达及镉蓄积状况,并探讨二者之间的关系。(2)经镉诱导,丙酮沉淀,Sephadex G-50凝胶过滤层析,DEAE-Superose Fast Flow离子交换层析,透析脱盐,冷冻干燥,从肝胰腺中分离纯化了MT,得到了纯度较高的华溪蟹MT,其主要以单体及二聚体形式存在,分子量分别为6890.6Da及13766.5Da。(3)经RT-PCR 扩增MT cDNA片段,进一步以3'-Race 及5'-Race法扩增3'端及5'端基因序列,获得了633bp的MT cDNA全长序列,阐明了华溪蟹MT的一级结构,补充完善了水生无脊椎动物MT的研究内容,为利用MT进行环境监测及重金属污染治理奠定了科学基础。