牙鲆HRI是鉴定的第一个鱼类HRI基因。本项目首先通过过量表达和功能缺失研究了HRI的抗病毒功能。在细胞中过量表达野生型HRI能导致eIF2α磷酸化水平增强,从而抑制病毒增殖;而当过量表达丧失激酶活性的HRI突变体则无此效应。RNA干扰实验进一步证实HRI表达受抑制时,eIF2α的磷酸化水平没有明显的变化,且病毒的复制增加。免疫共沉淀也证实HRI能结合eIF2α,表明HRI能通过磷酸化底物eIF2α而抑制病毒蛋白翻译。采用基因组步移的方法获得了HRI基因的启动子序列,该序列具有典型的TATA和CAAT元件。HRI主要定位于细胞质中,激酶区的失活突变对HRI的定位没有影响。与之前鉴定和另一个eIF2α激酶PKR相似,在病毒诱导细胞和组织中,HRI的表达上调。本项目研究结果证实了鱼类HRI基因在抗病毒免疫反应中发挥抑制蛋白翻译的功能。
英文主题词Paralichthys olivaceus; eIF2α kinase; HRI; antiviral defense