中文摘要：

尿激酶型纤溶酶原激活因子（uPA）多途径参与男性生殖生理过程，理论上阻止uPA基因表达可在多环节多途径影响男性生育功能。本项目利用四环素与阻遏子竞争性结合四环素操纵子这一特点，设计四环素操纵子调控的uPA shRNA慢病毒表达载体，感染小鼠睾丸支持细胞（TM4），利用强力霉素（Dox）进行体外诱导，通过实时荧光定量PCR、Western-Blot以及S2251发色底物法检测uPA表达和酶活性的变化。结果表明，Dox对uPA shRNA表达载体显示出明显的调控作用，其抑制uPA表达可维持至72h。移除Dox后，uPA表达水平在48h内逐渐恢复。然后通过动物体内实验，检测此可控系统在小鼠体内的调控效应，观察uPA基因下调后对雄性小鼠生育力的影响及可逆性。结果表明，Dox调控后，睾丸组织uPA的mRNA、蛋白水平及酶活性下调；小鼠精子活力下降、交配雌鼠妊娠率降低、平均胎仔数下降；雄鼠睾丸、附睾及主要脏器组织结构无明显影响。uPA下调可影响雄性小鼠生育力，调控作用具有可逆性，生育力指标8w后可完全恢复，实现了睾丸内uPA表达的有效调控，为男性生育调控找到新的理想靶点。