中文摘要：

黑素瘤是一种高恶性、易转移、预后差的恶性肿瘤，但其侵袭、转移的机制尚不清楚，目前认为Wnt5a/Ca2+通路参与了黑素瘤的进展，但精确的调控机制仍不明确，而且研究结果有矛盾之处。我们曾发现在不同发展阶段的黑素瘤细胞株中Wnt5a的表达及细胞内Ca2+浓度均有不同程度的增高，NFAT（Ca2+依赖性磷酸酶calcineurin的反应性转录因子）也有高表达，推测在Wnt5a与NFAT之间存在一条Wnt5a/Ca2+/calcineurin/NFAT通路。本课题将对该通路在黑素瘤侵袭转移中的作用及其分子调控机制进行全面探讨。拟采用免疫组化、RT-PCR、Western blot、Ca2+成像、基因转染、RNA干涉、药物处理及动物实验等技术，从组织水平、细胞水平及活体实验三方面观察该通路的激活状态，以及调控该通路对黑素瘤细胞侵袭转移的影响。有望为进一步揭示黑素瘤的发病机制及分子靶向治疗奠定基础。

结论摘要：

恶性黑素瘤是一种高恶性、易转移、预后差的恶性肿瘤，但其侵袭、转移的精确机制尚不清楚。研究发现Wnt5a/Ca2+通路参与了黑素瘤的发展过程， 活化T细胞核因子（NFAT）是一种Ca2+依赖的转录因子，与多种恶性肿瘤的发生、发展相关。我们的前期研究工作发现，在不同发展阶段的黑素瘤细胞株中，Wnt5a的表达及细胞内Ca2+浓度均有不同程度的增高，NFAT也有高表达，因此推测在Wnt5a与NFAT之间存在一条Wnt5a/Ca2+/Calcineurin/NFAT信号通路。在恶性黑素瘤中，证实Wnt5a/Ca2+/Calcineurin/NFAT信号通路的存在及其调控机制、明确该通路在恶性黑素瘤发病机制中的作用对于黑素瘤的靶向治疗将具有重要的意义。本项目首先利用免疫组织化学、RT-PCR、激光共聚焦法及Western blot检测了恶性黑素瘤中Wnt5a/Ca2+/Calcineurin/NFAT信号通路中信号分子的表达情况，证实了该通路的激活状态；同时利用慢病毒包装系统构建Wnt5a的过表达载体和Wnt5a的siRNA表达载体，转染黑素瘤细胞株，应用Western blot、平板克隆试验、MTT、划痕试验及Transwell试验检测转染后黑素瘤细胞中信号分子的表达情况及细胞的增殖、侵袭能力的变化，证实wnt5a高表达可以通过激活下游信号分子促进黑素瘤的增殖、侵袭能力。通过检测环孢素A(CsA)处理过的恶性黑素瘤细胞系的细胞生物学性状，发现靶向抑制Calcineurin可以抑制黑素瘤细胞的侵袭能力，该研究为拓宽转移性黑素瘤的治疗思路、进一步揭示恶性黑素瘤的发病机制及分子靶向治疗奠定了基础。