中文摘要：

微环境的改变和相关信号途径的异常激活是引发干细胞自我更新失调控和肿瘤发生的重要原因。本项目以人乳腺癌组织中的原代成纤维细胞和乳腺癌干细胞为研究对象，在体内外经三维培养模型和鼠模型的构建来模拟人乳腺微环境，分组验证癌相关成纤维细胞通过旁分泌途径过表达Wnt10a，是导致乳腺癌干细胞自我更新加速和抑制细胞分化的关键性因素之一。通过系统地研究肿瘤微环境和Wnt信号途径调控人乳腺癌干细胞自我更新和分化的作用机制，以期深入阐明乳腺癌的发病机理，并探讨从肿瘤微环境角度防治乳腺癌的可行性。

结论摘要：

目的检测多个Wnt基因及蛋白在癌相关成纤维细胞（CAFs）和正常乳腺成纤维细胞（NBFs）中表达的差异，探讨CAFs通过旁分泌途径异常激活乳腺上皮细胞Wnt信号途径的机制及CAFs通过 Wnt 信号通路对乳腺癌细胞增殖的影响。方法CAFs和NBFs原代培养；原代癌相关成纤维细胞CAFs体外慢病毒感染；采用实时定量PCR检测Wnt信号通路相关基因在CAFs 和NBFs中基因表达的差异；采用Western blot检测其在CAFs 和NBFs中蛋白表达的差异；建立Matrigel胶三维立体细胞培养模型进行CAFs/NBFs 和 MCF-7 体外共培养，计算MCF-7 细胞克隆率；采用Transwell 小室将 CAFs / NBFs 与 MCF-7 间接共培养， 检测各组MCF-7 中 Wnt3A、Wnt5A、Wnt10B 基因表达的差异。结果 Wnt5A基因在CAFs中的表达明显低于NBFs；Wnt10B基因在CAFs中的表达明显高于NBFs；Wnt3A、Wnt5A和Wnt10B蛋白在CAFs中的表达均明显高于NBFs；Matrigel 胶双层细胞的三维立体培养结果提示CAFs 对 MCF-7克隆有促进作用。Wnt3A 单抗、Wnt10B 单抗对 CAFs 有抑制作用，但作用不完全； Wnt10B 单抗对 CAFs 的抑制作用比 Wnt3A单抗更强； Wnt5A 对 CAFs 的抑制作用不明显。间接共培养结果显示，实验组 MCF-7 细胞中 Wnt3A、Wnt5A、Wnt10B mRNA 的表达均有所上调。混合CAFs的乳腺癌肿瘤细胞在裸鼠体内成瘤周期更短，肿瘤生长速度更快。结论CAFs对乳腺癌细胞有促增值作用，CAFs可以通过上调Wnt3A和Wnt10B 蛋白水平来影响乳腺上皮细胞Wnt信号途径，促进人乳腺癌的发生；其中Wnt10B在基因和蛋白水平都表现出一致性的上调，可能是进一步研究的理想靶点。