中文摘要：

基于抗原和抗体间特异性相互识别作用的免疫亲和色谱法是选择性地分离和浓缩复杂样品体系中微量成分的最有效技术之一，而用于固定抗体的固相载体的性质以及抗体与载体间的联接方式对于所制备的亲和色谱的专一性、吸附容量和稳定性等均具有重要影响。目前普遍使用的琼脂糖凝胶4B等凝胶类载体不耐高压，稳定性差，建立的方法不易标准化，且难以在高压液相色谱仪上在线使用，因而采用刚性载体制备免疫亲和色谱已是势在必行。本项目拟针对抗体分子的结构和性质特点，详细研究其在HPLC级固相载体上定向固定化的方法，通过活化IgG分子的Fc端与载体共价偶联，最大限度地保留并表露具有抗原结合活性的Fab端，以期制备出高吸附容量的刚性免疫吸附剂，并应用于生物样品体系中外源性雌激素的在线分离检测，这对简化复杂样品体系的处理程序、提高纯化效率、加快分析速度具有十分重要的意义，也可为亲和色谱的在线化和标准化发展提供可靠的依据。

结论摘要：

基于抗原和抗体间特异性相互识别作用的免疫亲和色谱法是选择性地分离和浓缩复杂样品体系中微量成分的最有效技术之一，而用于固定抗体的固相载体的性质以及抗体与载体间的联接方式对于所制备的亲和色谱的专一性、吸附容量和稳定性等均具有重要影响。目前普遍使用的琼脂糖凝胶4B 等凝胶类载体不耐高压，稳定性差，建立的方法不易标准化，且难以在高压液相色谱仪上在线使用，因而采用刚性载体制备免疫亲和色谱已是势在必行。本项目拟针对抗体分子的结构和性质特点，详细研究其在HPLC 级固相载体上定向固定化的方法，通过活化IgG 分子的Fc 端与载体共价偶联，最大限度地保留并表露具有抗原结合活性的Fab 端，以期制备出高吸附容量的刚性免疫吸附剂，并应用于生物样品体系中外源性雌激素的在线分离检测，这对简化复杂样品体系的处理程序、提高纯化效率、加快分析速度具有十分重要的意义，也可为亲和色谱的在线化和标准化发展提供可靠的依据。