中文摘要：

辅助生育的发展亟待对卵泡整个漫长复杂的生长机理进行深入的研究，以给临床提供重要的理论支持。卵泡生长涉及多方面因素影响，既往研究亦多进行短期培养，难以对卵泡的生长有深入的认识。本研究组近年已经对卵巢组织生长、分化进行了研究，建立了人类卵巢组织冷冻保存、异种移植（SCID小鼠）长期生长模型以及体外短期培养技术，为下一步卵巢组织生理实验积累了丰富经验。本研究目的是探索更长时限人类卵巢组织体外培养方法，以重点研究人体主要内分泌激素对人类卵巢中各级卵泡长期生长及分化的影响。研究分三部分包括1、研究新鲜组织（参照态）中各组分重要因子表达情况；2、摸索人类卵巢组织长期培养技术的建立（培养态），并将"参照态"与"培养态"数据进行比较，选择最合理的培养方法；3、使用此培养技术重点研究多种主要内分泌激素对人类卵巢组织生长的作用。期望所观察到的人类卵泡生长发育现象能为今后深一步认识卵巢组织提供理论支持。

结论摘要：

卵泡生长涉及多方面因素影响，目前对卵泡的生长的认识缺乏。本研究目的是探索更长时限人类卵巢组织体外培养方法，重点研究主要内分泌激素对人类卵巢中各级卵泡长期生长及分化的影响。研究分三部分1、研究新鲜组织中各组分重要因子表达情况；2、摸索人类卵巢组织长期培养技术的建立；3、使用此培养技术研究主要内分泌激素对人类卵巢组织生长的作用。通过本课题实施获得如下主要结果（一）卵巢组织相关因子表达及凋亡研究方面显示颗粒细胞是表达MMP-9最活跃细胞，在生长分化过程稳定持续表达。Ki-67增殖阳性信号在卵巢组织内呈稀疏散在分布，窦卵泡和次级卵泡中颗粒细胞相对较多表达。在凋亡研究方面，总Caspase-3检测结果发现，组织中所有类型的卵泡都可有阳性表达。而Active Caspase-3组化和TUNEL原位杂交结果显示人卵巢组织中只在窦卵泡颗粒细胞和间质有散在阳性细胞，其余各级卵泡阴性。我们进行了正常月经周期不孕女性血清睾酮水平的分析，发现血清睾丸激素与卵巢储备评估指标有关，对IVF治疗周期结局亦有影响。基础性激素水平对卵子体外受精率无影响。同时发现敞开式授精受精失败率比微滴法要低。我们分析PCOS患者颗粒细胞ADAMTS1的表达，发现其在PCOS中差异表达。结果提示在PCOS中下调的ADAMTS1与其低的获卵率，卵子成熟率，受精率密切相关。 (二)建立Matrigel和低熔点琼脂的卵巢组织体外培养系统。两者均能够支持人类卵巢较长时限的研究。在人类卵巢组织体外生长的12周期间，原始卵泡能迅速启动生长，卵泡生长池率增加。但培养后颗粒细胞显得明显肥大，出现卵子与颗粒细胞生长不同步现象。而间质组织在培养后无明显改变。（三）我们分组观察雄激素和高浓度胰岛素对卵巢组织体外生长影响。结果显示同时添加睾酮和高浓度胰岛素组总体卵泡存活率最高，对雌二醇、孕激素分泌及MMP-9分泌亦有促进作用，差别有统计学意义。通过将人类卵巢组织异种移植到SCID小鼠皮下在体探索性激素对卵巢组织生长影响。结果显示宿主性别、去势情况对原始卵泡存活率没明显影响。但局部无菌创口移植有较高原始卵泡存活率的趋势明显。通过本项目实施，我们更深入了解了人类卵巢组织和内分泌激素之间的生理关系，建立了良好的长时限体外培养方法，并进行了部分内分泌激素和卵泡体外生长关系研究，为认识卵巢组织提供了良好的参考资料。