贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)是Q热(Q fever)的病原菌,该菌为高传染和高致病病原体,属于生物战剂和生物恐怖剂。本课题拟选取从中国重庆分离得到的贝氏柯克斯体新桥株,制备双向电泳蛋白质样品,并感染动物制备抗血清,通过免疫蛋白质组学的方法筛选能与感染血清反应的贝氏柯克斯体蛋白;通过标记的单核/巨噬细胞与贝氏柯克斯体全菌蛋白反应来寻找能与单核/巨噬细胞相互作用的蛋白;并将筛选到的蛋白分别克隆表达并免疫动物,评价它们的免疫原性和免疫保护效能,从而筛选到新的保护性抗原,为构建多抗原分子组合的免疫保护效果好的Q热分子疫苗打下坚实的基础。
Coxiella burnetii;Q fever;immunoproteomics;serodiagnostic markers;protective antigens
贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)是Q热(Q fever)的病原菌,该菌为高传染和高致病病原体,属于生物战剂和生物恐怖剂。本课题选取从中国重庆分得的贝氏柯克斯体新桥株做双向电泳,通过免疫蛋白质组学的方法筛选能与贝氏柯克斯体感染血清反应的蛋白,结果共鉴定出20个Q 热血清反应阳性贝氏柯克斯体蛋白。通过制备阳性重组蛋白芯片并与Q 热患者血清反应,筛选出7 个Q 热诊断抗原。通过将重组抗原GroEL,Com1,Mip体外激活树突细胞转移至正常小鼠,后用贝氏柯克斯体毒株攻击受体小鼠,结果显示接受Com1或Mip激活树突状细胞的受体小鼠体内贝氏柯克斯体载量显著低于对照组,证明Com1 和Mip 为贝氏柯克斯体的保护性抗原。将重组蛋白Com1 和Mip激活的树突状细胞分别与同源抗原免疫小鼠的T 细胞体外相互作用后,流式细胞分析发现保护性抗原均能诱导机体产生Th1 型为主的特异性细胞免疫应答,产生高水平的抗胞内菌IFN-γ 。该研究为构建新一代Q热分子诊断试剂和多抗原分子组合的Q热分子疫苗打下坚实的基础。该研究目前发表第一作者论文4 篇(SCI 论文3 篇),国际会议墙报1 篇,申报国家发明专利3 项.