骨质疏松症是一种严重影响广大人民身心健康的常见病、多发病,补肾中药对骨质疏松有良好确切的疗效,但其药效学机制还不很清楚。本课题拟运用中药血清药理学、分子生物学和基因芯片的技术方法与原理,通过建立体外共培养的OB、OC体系,制备OB、OC的基因表达芯片,对比观察补肾中药作用前后,OB、OC生长、分化以及基因表达谱的发展变化,特别是OC活化重要相关基因(OPN、BSP、OPG、OPGL、RANK,等)的表达情况,并观察补肾中药对OC活化以及对活化OC的影响及相关基因的表达调控,以求从细胞分子水平进一步阐明补肾中药抗骨质疏松的作用机理,揭示中医"肾主骨"理论的实质,为指导临床及开发新药打下理论基础。
本课题以探索补肾中药骨灵丸治疗骨质疏松症的作用和机制为目的,系统的研究了骨灵丸对体外培养的成骨细胞(osteoblast, OB)、破骨细胞(osteoclast, OC)以及共培体中OC的功能和相关基因表达的影响。研究成功建立了OB、OC的体外培养体系和共培体系,采用血清药理学的方法以骨灵丸干预体外培养的OB、OC,观察了补肾中药对OB、OC分化、功能的影响,采用半定量RT-PCR、western-blot、荧光定量PCR等方法检测了补肾中药对OC活化有重要影响的OPN、OPG、RANKL、RANK等基因和蛋白表达的影响,并进一步研究了p38MAPK信号途径在骨灵丸影响OB功能和基因表达中的作用。研究结果显示1.补肾中药骨灵丸可增加成骨细胞的功能;2.骨灵丸可抑制破骨细胞的骨吸收作用;3.骨灵丸可抑制OPN、OPG、RANKL、RANK基因和蛋白的表达;4.骨灵丸可通过影响共培体中OB蛋白的表达而影响OC的功能;5.骨灵丸影响OB功能和基因表达的作用可能与p38MAPK信号途径有关。本研究为中医药治疗骨质疏松提供了重要了理论和实验依据。